抗C-fms抗体对小鼠骨髓细胞体外破骨细胞生成的影响

摘要

来源：Marahleh, A.，等。抗c-fms抗体对体外破骨细胞前体形成及增殖的影响。J. Vis. Exp. (2019)

在本视频中，我们展示了不同抗 c-fms 抗体浓度对破骨细胞生成的影响，破骨细胞生成是指破骨细胞前体形成破骨细胞的过程。

方案

1. 骨髓来源巨噬细胞（BMM）的制备

1. 在10 cm培养皿中接种1 × 10⁷ 个细胞/10 mL，并加入M-CSF至终浓度为100 ng/mL。将细胞在37 °C、5% CO₂条件下培养3天。
2. 培养3天后，移除培养基，用10 mL磷酸盐缓冲液（PBS）剧烈冲洗细胞两次，以去除未贴壁细胞；加入5 mL室温的含0.02%胰蛋白酶-EDTA的PBS溶液，在37 °C、5% CO₂条件下孵育5分钟。
3. 通过充分吹打使细胞脱落。在显微镜下观察确认细胞是否已脱落（细胞应呈圆形并悬浮于培养基中）。若细胞仍贴壁，需重复充分吹打直至脱落。细胞脱落后，加入5 mL α-MEM以终止反应。
4. 将细胞收集至50 mL锥形离心管中，在300 × g条件下离心5分钟。弃上清，用5 mL α-MEM洗涤细胞沉淀。
5. 在300 × g条件下离心5分钟，将沉淀重悬于10 mL α-MEM中。
6. 进行细胞计数。
7. 在10 cm培养皿中接种1 × 10⁶ 个细胞/10 mL，并加入M-CSF至终浓度为100 ng/mL。将细胞在37 °C、5% CO₂条件下培养3天。

2. 以....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
抗c-Fms抗体			AFS98，一种大鼠单克隆抗小鼠c-Fms抗体（IgG2a）
RANKL	PEPROTECH	315-11	重组小鼠可溶性RANK配体，来源：大肠杆菌（E.coli）
M-CSF			重组人M-CSF。取CMG14–12细胞系在10 cm悬浮培养皿中以5×10⁶个细胞培养所得上清液的1/10体积。
α-MEM	Wako		含L-谷氨酰胺和酚红
胎牛血清	Biowest	s1820-500	源自法国的胎牛血清
培养皿	Corning		100 mm × 20 mm 规格培养皿
96孔板	Thermofisher Scientific		Nunclon Delta表面处理