一种用于研究宿主-微生物群相互作用的离体肠道器官培养系统

摘要

来源：Azriel, S.，等。一种用于分析宿主-微生物群相互作用的肠道类器官培养系统。视觉化实验杂志 (2021)。

在本视频中，我们介绍了建立一个 离体 用于研究小鼠肠组织片段与特定肠道细菌相互作用的肠道器官培养系统。该装置包含两对进出液端口，第一对连接肠组织管腔并将其与特定细菌悬液相连，第二对持续向装置的孔中供给培养基以维持 离体 组织活力

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 实验准备

1. 肠道类器官培养装置的制备（3天）
   1. 使用3D打印机打印可重复使用的类器官培养装置塑料模具（该装置包含6个孔，24个大小孔洞，以及装置盖子）。
      注意：这些塑料模具可用于制备多个装置。
   2. 将钝端针头（22 G 和 18 G）插入装置模具中相应位置，并为一套装置及盖子浇注约20 g的聚二甲基硅氧烷（PDMS）混合物（基础剂与催化剂质量比为1:10）。
   3. 将模具置于真空腔中30分钟，以去除PDMS混合物中的气泡。
   4. 将模具在55 °C下孵育过夜，以完成PDMS的聚合。
   5. PDMS固化后，从模具中拔出针头，并小心地将培养装置和盖子从塑料模具中取出。
   6. 使用手术刀去除孔洞边缘残留的PDMS。使用无毒硅胶粘合剂将PDMS装置及其盖子固定在盖玻片（75 mm × 50 mm 显微载片）上，并静置过夜使其固化（将胶水涂在装置的光滑面）。
   7. 插入十二根22 G针头用于管腔，十二根18 G针头用于孔腔。使用硅胶固定所有针头并静置过夜。在盖子上插入两根18 G针头，以确保肠道类器官培养装置内有适当的空气流通。
   8. 使用装水的注射器检查所....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
设备
18号钝针	Mcmaster	75165a754
22号钝针	Mcmaster	75165a758
通用型100%硅胶密封胶	DAP	688
立方体真空干燥器 VDC-21+ 2层搁板		AAAD4021
1 mm厚玻璃载片	Corning	2947-75X50
迷你培养箱 im-10		AAH24315K
MPC 301E 真空泵		VI-412711
塑料快接式管塞	Mcmaster	51525k121
塑料快接式管接头	Mcmaster	52525k211
Sylgard 184 硅橡胶弹性体	Dow		聚二甲基硅氧烷，PDMS
导管	Mcmaster	6516t11
Zortrax M200	Zortrax		Zortrax Z-SUITE，Autodesk Fusion 360
Zortrax M200 材料：z-ultrat	Zortrax
培养基
B27添加剂（50倍浓度），无血清	Thermo Fisher Scientific	17504044
含酚红的Iscove改良型DMEM培养基（1倍浓度）	Thermo Fisher Scientific	12440061
HEPES缓冲液（1 M）	Thermo Fisher Scientific	15630056
Knock-Out 血清	Thermo Fisher Scientific	10828028
N2添加剂（100倍浓度）	Thermo Fisher Scientific	A1370701
非必需氨基酸（100倍浓度）	Thermo Fisher Scientific	11140035
手术器械
大剪刀	Aseltech	11-00-10
尖头镊子	F.S.T	11297-10
编织丝线手术缝合线	SMI	8010G
直剪刀	F.S.T	14091-09
细镊子	F.S.T	11051-10
器官系统
0.1 µm 滤器	Life Gene
0.22 µm 滤器	Life Gene
5 mL 鲁尔锁注射器	B-D	309649
Greenough体视显微镜	ZEISS	Stemi 305
循环式精密空气加热器 "CUBE"		CUBE-2-LIS
注射泵	New Era Pump Systems Inc	nep-ne-1600-em