感染人源组织细胞中炎症介质的定量分析

摘要

来源：Dousha, L. 等人， 评估呼吸道免疫应答 流感嗜血杆菌. J. Vis. Exp. (2021)

本视频展示了通过将人肺组织来源的免疫细胞与流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）共孵育，以量化感染过程中炎症介质的方法。采用流式细胞术检测标记淋巴细胞中的细胞因子荧光信号，从而反映细菌感染后促炎性细胞因子的产生情况。

方案

所有涉及人类受试者的研究程序均按照机构、国家及国际人类福利指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审核。

1. 抗原制备

1. 活细菌
   1. 首先，对活细菌进行表征。从适当的样本（如痰液或支气管镜样本）中获取细菌。通过适当的微生物学实验室确认菌株为 Haemophilus influenzae 。对 H. influenzae 样本进行分型，以确认其为无荚膜型（由专业微生物学实验室完成）。使用一个特征明确的菌株，并确保该菌株也保存在-70 °C的甘油肉汤中作为储备。
   2. 在富含营养的培养基（如巧克力琼脂平板或液体培养基）中培养细菌。
      1. 若使用巧克力琼脂平板，需用无菌涂布棒每隔至少3–4天对细菌进行一次涂布传代。
      2. 或者，使用添加了X因子（血红素）和V因子（β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）的脑心浸液（BHI）肉汤培养细菌。从过夜培养的平板中接种非荚膜型 H. influenzae（NTHi）至5–10 mL BHI肉汤中，该肉汤需补充血红素和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（均为10 µg/mL），并在37 °C、5%二氧化碳（CO₂ ）培养箱中过夜培养。
         注意：此方法具有可重复性好、....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
氯化铵	Sigma Aldrich	213330
布雷菲德菌素	Sigma Aldrich	B6542
Filcon 无菌尼龙筛网	Becton Dickinson	340606
明胶底物，Enzchek	Molecular probes	E12055
MACS 混合管旋转仪	Miltenyi Biotec	130-090-753
Medimachine	Becton Dickinson		目录编号不可用
皂苷	Sigma Aldrich	8047152