一种通过脓毒针刺技术在果蝇中诱导全身性细菌感染的方法

摘要

来源：Khalil, S., 等. 系统性细菌感染与免疫防御表型 黑腹果蝇. 视频实验杂志 (2015)

本视频展示了一种通过将病原细菌直接注入果蝇体腔来感染Drosophila的技术。该方法可绕过上皮屏障及其他被动防御机制，从而诱导系统性感染。感染后，通过监测果蝇死亡率并进行下游检测，评估所引发的免疫反应。

方案

1. 收集并准备果蝇

1. 在所需的实验条件下饲养黑腹果蝇（D. melanogaster）。饲养过程中注意避免果蝇过度拥挤，并确保各处理组间的幼虫密度保持一致，因为幼虫阶段的环境条件会显著影响成虫阶段的免疫防御表型。
2. 在羽化后0至3天内收集实验用果蝇，并将其转移至新鲜培养基中。
3. 将收集的果蝇置于适宜温度下（通常22 °C至28 °C之间较为合适），饲养至羽化后5至7天龄。
   注意：此阶段足以使果蝇完成变态发育并成为成熟成虫，但仍远早于衰老期的开始。
4. 在感染前将所需数量的果蝇分选至单独的试管中，同样需注意避免过度拥挤。
   注意：本演示中仅感染雄性果蝇，但使用所述方法同样可对雌性果蝇进行感染。

2. 培养并制备细菌

1. 至少在感染前2天制备所选细菌的母板。从长期保存于-80 °C的15%甘油菌种中划线接种细菌。母板可保存在4 °C下最长2周。每次均须直接从冷冻甘油菌种中划线制备母板。避免将细菌在平板之间连续传代，因反复培养传代可能导致细菌毒力减弱。
   注意： 此示例使用了 普罗威登斯菌属雷特格里菌 和 大肠杆菌.....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
培养箱	Powers Scientific, Inc	DROS52SD
画笔
CO2 果蝇麻醉垫	FlyStuff	59-114
CO2	Airgas	CD FG50
果蝇培养基混合物
6 oz 方底瓶，聚丙烯材质	Genesee Scientific	32-130
非无菌超大棉球	Fisher brand	22-456-882
显微镜	Olympus Corporation	SZ51
聚苯乙烯果蝇培养管	VWR international	89092-720
非无菌大号棉球	Fisher brand	22-456-883
2L 锥形瓶	VWR international	89000-370
带透明盖、凸缘的培养皿；100 × 15 mm	VWR international	25384-302
LB 琼脂，Miller 配方	Difco	244520
接种环	VWR international	80094-488
Rainin Clasic 移液器（多种规格） 0.1 µl 至 2 µl， 2 µl 至 20 µl， 20 µl 至 200 µl， 100 µl 至 1000 µl	Rainin	PR-2 PR-20 PR-200 PR-1000
移液器吸头（多种规格）	VWR international	30128-376 53503-810 16466-008
LB 肉汤基础，Miller 配方	Difco	241420
一次性培养管，硼硅酸盐玻璃材质	VWR international	47729-576
S-500 轨道摇床	VWR international	14005-830
离心机	VWR international	37001-300
PBS 缓冲液，pH 7.4，10 倍浓缩液	Invitrogen	70011044
SmartSpec 3000 分光光度计	Bio-Rad	170-2501
半微量比色皿	Bio-Rad	223-9955
镊子	Fine Science Tools	11255-20
矿物油，白色，轻质	Macron Fine Chemicals	6358-10
Minutein 固定针	Fine Science Tools	26002-10
1.5 mL 微量离心管；Seal Rite 品牌	USA Scientific Inc.	1615-5500