测定病毒感染剂量的实验方法 果蝇 培养昆虫细胞中的C病毒

摘要

来源：Yang, S. 等 建立病毒感染及宿主-病毒相互作用分析 黑腹果蝇 视频实验杂志 (2019)

在本视频中，我们演示了细胞病变效应检测法，用于测定果蝇C病毒在Drosophila S2*细胞上的组织培养感染性病毒剂量。通过一系列不同浓度的病毒液感染培养细胞，观察出现结构变化的细胞比例，并利用该数据计算组织培养感染剂量。

方案

1. 通过CPE实验测定果蝇C病毒载量

1. 随机选取5个含有病毒的试管，通过细胞病变效应（CPE）实验测定平均病毒组织培养感染剂量（TCID₅₀）（1个TCID₅₀单位 = 0.7个噬斑形成单位[PFU]）。
   注意： CPE是指病毒侵入宿主细胞后引起的细胞结构变化。感染性病毒可导致宿主细胞裂解，或因细胞失去增殖能力而发生非裂解性死亡。
2. 第1天，用移液器收集已准备好的S2*细胞，计数细胞数量。以300 × g 离心4分钟，弃去上清液。用S2*细胞完全培养基将细胞重悬至密度为1 × 10⁶ 个细胞/mL。
3. 每孔接种1 × 10⁵ 个S2*细胞（100 μL）至平底96孔板中（约30%汇合度）。
4. 用S2*细胞完全培养基对DCV原液进行10倍系列稀释。每孔加入50 µL稀释液。将50 µL不含病毒的培养基加入被定义为阴性对照孔的孔中。
   注意： 每个稀释度使用8个孔。由于典型的DCV产量约为10⁸–10⁹ PFU/mL，稀释梯度应至少覆盖约10⁻⁵–10⁻¹⁰。
5. 第4天，使用20X或40X物镜的明场显微镜观察CPE。将细胞形....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1.5 ml 微型离心管	品牌	352070
10 cm 细胞培养皿	Sigma	CLS430167	细胞培养
细胞培养箱	Sanyo	MIR-553
离心机	Eppendorf	5810R
离心机	Eppendorf	5424R
Drosophila 培养箱	Percival	I-41NL	饲养 Drosophila
FBS	Invitrogen	12657-029	细胞培养
Schneider's 昆虫培养基	Sigma	S9895	细胞培养
统计分析软件	GraphPad Prism 7
平底 96 孔板	Sigma	CLS3922	细胞培养
细胞培养箱	Sanyo	MIR-553
显微镜	Olympus	CKX41