一种通过诱导皮肤炎症评估抗原免疫应答的技术

摘要

来源：Yao, Y., 等 利用IL-1β启动子驱动的DsRed报告小鼠进行中性粒细胞预激活的活体成像。J. Vis. Exp. (2016)。

本视频展示了一种在小鼠模型中通过诱导皮肤炎症来评估测试抗原的体内技术。将测试抗原（一种溶于油/丙酮溶液的半抗原）局部涂抹于小鼠耳部皮肤，在适当时间后评估皮肤炎症反应。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 在pIL1-DsRed小鼠中诱导皮肤炎症

1. 通过腹腔（i.p.）注射含有100 mg/kg氯胺酮、10 mg/kg赛拉嗪和1 mg/kg乙酰丙嗪的麻醉混合剂对小鼠进行麻醉。充分麻醉的小鼠在脚趾夹捏时不会出现后肢回缩反应。
2. 将脱毛膏涂抹于小鼠双耳的背侧表面，等待30秒至1分钟。用蘸水的棉签擦拭耳部表面，并使其自然风干。
3. 使用千分尺测量耳部厚度，并将小鼠放回单独的笼子中。观察直至其从麻醉中恢复（约15–30分钟）。为消除脱毛产品引起的皮肤炎症，需让小鼠休息3天后再进行后续实验。
4. 通过将16.7 mg奥沙唑酮（OX）溶解于1 ml丙酮中，再取750 µl OX/丙酮溶液与250 µl橄榄油混合，配制1.25%（w/v）的奥沙唑酮（OX）溶液。通过将750 µl丙酮与250 µl橄榄油混合，制备对照溶剂溶液。
5. 再次通过腹腔（i.p.）注射麻醉混合剂（1.1）对小鼠进行麻醉。按之前方法测量耳部厚度。
6. 在右耳的两侧各涂抹12.5 µl的1.25% OX溶液。在左耳的两侧各涂抹12.5 µl的丙酮/橄榄油对照溶剂溶液。
7. 在小鼠完全恢复前将其与同笼小鼠隔离，以防止其他小鼠对其耳部造成损伤，之后将小鼠放回原笼并送回动物饲养设施。
   注意：脱毛可能导致轻微的皮肤炎症，进而引起耳部厚度变化。该轻微炎症在3天后消退，耳部厚度恢复正常。外用处理24小时后，OX处理组耳朵与仅使用对照溶剂组相比表现出显著肿胀（p < 0.01）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
盐酸氯胺酮	Hospira	NDC 0409-2051-05
赛拉嗪	LLOYD Laboratory	NADA #139-236
乙酰丙嗪	Boehringer Ingelheim	ANADA 200-361
脱毛膏	Church & Dwight
丙酮	Fisher Scientific	A16P4
恶唑酮	Sigma-Aldrich	E0753