通过打孔活检法在小鼠模型中制备全层皮肤缺损伤口

摘要

来源：Anderson, L. S. 等，一种用于评估对Staphylococcus aureus感染先天免疫反应的小鼠模型。J. Vis. Exp.（2019）

本视频演示了在小鼠模型中进行穿孔活检以制造精确伤口的操作过程。切除后暴露皮下层皮肤，为研究局部病原体感染的免疫反应提供了合适的实验位点。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 小鼠来源与饲养

1. 如前所述，在 C57BL/6J 遗传背景下培育溶菌酶 M-增强型绿色荧光蛋白（LysM-eGFP）小鼠。通过将 LysM-EGFP 小鼠与 C57BL/6J 背景的髓样分化初级反应蛋白 88（MyD88）基因敲除（MyD88-/-）小鼠杂交，获得 LysM-EGFP×MyD88-/- 小鼠。
2. 将小鼠饲养于动物实验中心。本研究中，动物在手术前于加州大学戴维斯分校以群养方式饲养，手术后则单笼饲养。使用年龄在 10 至 16 周之间的小鼠。

2. 皮肤切除性伤口模型

1. 向每只小鼠注射 100 µL 浓度为 0.03 mg/mL 的盐酸丁丙诺啡溶液（约 0.2 mg/kg） 通过 腹腔注射
2. 注射后20分钟，将2至4只小鼠放入麻醉室，通入2-3升/分钟（LPM）的氧气，并含2-4%异氟烷。待小鼠完全麻醉后，逐只转移至连接有2-3 LPM氧气和2-4%异氟烷的鼻罩装置中。用拇指和食指用力夹捏每只小鼠后肢足垫以确认其是否完全麻醉，若小鼠对夹捏无反应，则进行下一步操作。
3. 用电动剪毛器在小鼠背部剃除一块1英寸×2英寸的区域，并用干净的擦拭巾或纱布清除剪下的毛发。避免使用脱毛乳液，因其可能引起过度炎症。
4. 先用含10%聚维酮碘的纱布擦拭小鼠背部，再用含70%乙醇的纱布擦拭。以螺旋方式清洁手术区域，从中心向外周移动。手术前等待约1分钟，使手术区域完全干燥。
5. 用两根手指轻轻夹住小鼠背部剃毛区域，将无菌的6 mm打孔活检器在手术准备区域的中心位置用力按压。切勿拉紧皮肤。
   1. 旋转皮肤活检钻孔器，在皮肤上形成一个环形切口，确保至少在切口的某一处完全穿透皮肤。注意避免切到深部的筋膜或组织。
   2. 使用无菌剪刀和镊子，沿穿刺活检留下的圆形印迹切割表皮和真皮。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
6 mm 一次性活检穿孔器	Integra Miltex	33-36
盐酸丁丙诺啡注射液	西方医疗用品公司	7292	0.3 mg/mL
C57BL/6J 小鼠	杰克逊实验室	664
LysM-eGFP 小鼠	Thomas Graff 阿尔伯特·爱因斯坦医学院，纽约	NA
MyD88 基因敲除小鼠	杰克逊实验室	9088
无纺布海绵	AMD- Ritmed Inc	A2101-CH	5 cm × 5 cm
聚维酮碘 10% 溶液	应用	697731