使用荧光成像检测细菌对宿主细胞的粘附

摘要

来源:Yang， J. 等人。 自动、高通量检测细菌对宿主细胞的粘附。J. Vis. Exp.（2021 年）

该视频演示了细菌粘附测定，以评估 GFP 标记的细菌对上皮细胞培养的粘附性，从而使用基于荧光显微镜的成像研究宿主-病原体相互作用的动力学。

方案

1. 细菌粘附和宿主细胞染色

1. 首先，用温热的 1x PBS 洗涤接种的 A549 细胞单层 3 次。每次洗涤，向每个孔中加入 100 μL 1x PBS，轻轻上下移液 3 次，处理 1x PBS 或在添加后等待 10 秒，然后抽真空以去除 1x PBS。为了确定细菌结合的动力学，用 100 μL 所需浓度的具有不同 MOI（0、1、10 和 100）的细菌悬浮液覆盖细胞。将细菌以 200 x g 离心 10 分钟，并在 37 °C、5% CO₂ 下孵育感染的 A549 细胞 1 小时
   注意: 在这个实验中，每个条件都有一式三份的技术副本。
2. 如上所述，通过用温热的 1x PBS 洗涤单层五次来去除未结合的细菌。向 96 孔板的每个孔中加入 100 μL 4% 甲醛（在 1x PBS 中）以固定细胞。让板在冰上静置 15 分钟，然后用 1x PBS 洗掉固定溶液 3 次。
3. 要对细胞核进行染色，请加入 50 ng/mL 的 4′，6-二脒基-2-苯基吲哚 （DAPI），并在室温下孵育 10 分钟。孵育后，使用 1x PBS 洗涤孔 3 次。用 100 μL 的 1x PBS 覆盖感染的 A549 细胞以避免干燥。下一步处理或将板在 4 °C 下避光保存长达 2 天。

材料