马拉色菌诱导的小鼠模型皮肤炎症及真菌负荷分析

摘要

来源：Sparber, F. 等人， 感染小鼠 马拉色菌 spp. 用于研究真菌-宿主相互作用。 视频实验杂志 (2019)

本视频演示 马拉色菌小鼠中由...诱导的皮肤感染 马拉色菌 将油性悬液涂抹于受伤的耳部，诱发耳组织的炎症与肿胀。随后取耳组织进行解剖、匀浆处理，并接种至琼脂平板培养。菌落数量反映皮肤炎症所致的真菌负荷。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 培养 马拉色菌 在实验室条件下

注意：除非另有说明，本方案中使用的所有试剂和培养基均应储存在室温（RT，20 – 25 °C）下，因为较低温度可能抑制真菌生长。

1. 制备液体改良Dixon（mDixon）培养基 马拉色菌 生长。配制500 mL液体mDixon培养基时，将18 g麦芽提取物、10 g脱水牛胆汁、5 mL Tween-40、3 g蛋白胨、1 mL甘油和1 mL油酸溶解于500 mL蒸馏H₂O (dH₂O）。用 HCl 将培养基 pH 值调至 6，然后高压灭菌。将培养基在室温下保存。
2. 在高压灭菌前，将7.5 g琼脂加入500 mL mDixon培养基中，制备mDixon琼脂平板。高压灭菌后，使用搅拌棒和磁力加热板缓慢冷却mDixon琼脂，以避免培养基在冷却过程中局部凝固。
3. 待琼脂冷却至 50 – 60 °C 后，在超净工作台中将液体分装至培养皿中，并于室温下静置过夜使其干燥。
   注意： 琼脂平板在包裹后倒置存放于4 °C，可保存数周以避免蒸发。
....

结果

图 1：马拉色菌的体外培养。（A）M. sympodialis 菌株 ATCC 42132 在 30 °C、180 rpm 条件下于液体 mDixon 培养基中培养 3 天（左侧），右侧为未接种的 mDixon 培养基对照三角瓶。（B）M. sympodialis 菌株 ATCC 42132 在 mDixon 琼脂平板上于 30 °C 培养 5 天后的菌落形态。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
琼脂	Sigma-Aldrich	A1296-1KG
异氟烷（Attane Isoflurane）	Piramal Healthcare	-
生物安全柜（BSC）Faster Ultra Safe	DASIT GROUP	TEC 5594	BSL2 认证
离心机	Eppendorf	5415D	兼容 2 ml Eppendorf 离心管
脱水牛胆汁	Sigma-Aldrich	70168-100G
Eppendorf 离心管（2 ml）	Eppendorf	0030 120.094
葡萄糖	Sigma-Aldrich	49159-5KG
甘油（99 %）	Honeywell	10314830
加热垫	Eickenmeyer	648048
孵育箱 Heraeus B20	Heraeus	412047753	BSL2 认证
赛拉嗪（Ketasol，100 mg）	Graeub AG	6680416
磁力加热板 MR Hei-Standard	Heidolph Instruments	442-1355
马拉色菌 spp.	ATCC	14522, 14521, 42132
麦芽提取物	Sigma-Aldrich	70167-500G
多联生物样本管（200 µl）	Sarstedt AG	7084211	Safelock
特级初榨橄榄油	-	-	市售可得
Nonidet P40	Axon Lab	A1694,0250
Oditest 测量装置	Kroeplin	S0247	量程 0–5 mm
油酸	Sigma-Aldrich	75090-5ML
蛋白胨	Oxoid	LP0037
培养皿	Sarstedt AG	82.1473
磷酸盐缓冲液（PBS，1×）	Amimed/Bioconcept	3-05F39
速眠新（Rompun，2 %）	Bayer	KP0BFHR
摇床孵育器 Infors Minitron	Infors	-	BSL2 认证
分光光度计	Jenway	20308	600 nm 处测定光密度
分光光度计比色皿	Greiner Bio-One	613101
不锈钢珠（5 mm）	ABF	KU.5G80 1.3541
1 ml 皮下注射器	BD Bioscience	305501
Tissue Lyzer II 组织研磨仪	Qiagen	85300
透气性低致敏胶带（Transpore）	3M	1527-1
吐温 40	Sigma-Aldrich	P1504-100ML
维生素 A 棕榈酸视黄酯眼霜	BAUSCH & LOMB		市售可得