一种完全分化的单核细胞来源巨噬细胞感染模型 结核分枝杆菌

摘要

来源：Mily, A., 等 人源单核细胞来源的M1与M2型极化及流式细胞术分析 结核分枝杆菌 感染。 视频实验杂志(2020).

本视频展示了一种用于研究人类M1和M2极化单核细胞来源巨噬细胞对结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）感染反应的方法。通过流式细胞术，可对感染与未感染巨噬细胞群体相关的多种表面标志物进行分析。

方案

1. 结核分枝杆菌感染单核细胞来源的细胞

注意：以下步骤必须在BSL-3实验室中进行。

1. 在新的无菌50 mL离心管中，将结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）菌体沉淀重悬于无血清RPMI培养基中，并调整最终细菌浓度至约5 × 10⁶ CFU/mL。
2. 移除含有单核细胞来源细胞的6孔板中的细胞培养基。每孔加入1 mL无血清RPMI培养基，再向每孔加入1 mL细菌悬液，使感染复数（MOI）为5:1，即每孔2 mL体系中含有5 × 10⁶ CFU细菌与10⁶个巨噬细胞，随后将培养板置于37°C、5% CO₂条件下孵育4小时。
3. 感染后，用1 mL无菌洗涤缓冲液洗涤细胞3次，以去除胞外细菌。倾斜培养板，从孔的角落小心吸去全部洗涤液。将感染Mtb后的单核细胞来源细胞重悬于2 mL不含抗生素的完全RPMI培养基中，随后直接进行流式细胞术染色，或继续培养24小时（或其他指定时间点）后再进行流式细胞术分析。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
8孔培养板	Lab-Tek	154534
RPMI 1640	Life Technologies Corporation	SH30096.01
IFN-γ	Peprotech	300-02
Na-丙酮酸盐	GE Healthcare Life Sciences	SH300239.01
L-谷氨酰胺	GE Healthcare Life Sciences	SH30034.01
Falcon 6孔平底培养板	Corning Life Sciences	353046
胎牛血清（FBS）	Sigma-Aldrich	F7524
GM-CSF	Peprotech	300-03