一种用于在离体条件下研究HIV致病机制的人宫颈黏膜感染模型

摘要

来源：Introini, A., 等 离体 人免疫缺陷病毒1型感染人淋巴组织和女性生殖道黏膜及组织培养 J. Vis. Exp. (2018).

本视频展示了利用人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）对人类子宫黏膜组织进行离体（ex vivo）感染，并将组织置于明胶海绵上于气液界面进行培养的方法。该方法可用于监测HIV-1在人体组织内的复制过程及致病机制。

方案

所有涉及人类参与者的操作均按照机构、国家和国际的人类福利指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 子宫颈黏膜的解剖与感染

注意：为获得最佳结果，宫颈黏膜外植体应在手术后尽快进行处理和感染，最好在手术当天进行。或者，标本可置于含抗生素的培养基（CMT）中，于4°C下浸没保存过夜，并在解剖后立即进行感染。

1. 让完全培养基（CM）充分平衡至室温，或将其置于预热至 37°C 的水浴中。使用前向完全培养基中添加抗生素溶液（CMT）。剩余的抗生素溶液应丢弃。将 70% 乙醇溶液倒入洁净容器中，用于在解剖过程中随时浸泡镊子和手术刀。在处理不同供体的样本之间，需清洁工具并更换手术刀刀片。
2. 使用无菌镊子将样本从运输容器转移至含有 10–20 mL CMT 的 100 mm 培养皿中。
3. 使用培养皿的盖子作为切割面进行组织解剖。用镊子轻轻夹住组织，用手术刀和刀片将宫颈外口和/或宫颈内口的黏膜层与下方的间质及肌层组织（黏膜下层）分离，以获得黏膜条。
   注意：在处理一块组织时，必须将其他组织保持浸没在培养基中，以防止组织干燥。
4. 将黏膜切成宽度为 2 mm 的条状，并尽可能去除和丢弃黏膜下层，仅保留约 2 mm 厚的组织层。再将条状组织切成 2 ....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Gelfoam 12-7 mm 可吸收明胶海绵	Pfizer	NDC: 0009-0315-08	Gelfoam 和 Spongostan 在扁桃体和宫颈组织的组织培养中表现相当。
SPONGOSTAN Standard 70 × 50 × 10 mm 可吸收止血明胶海绵	Ferrosan Medical Devices	MS0002	Gelfoam 和 Spongostan 在扁桃体和宫颈组织的组织培养中表现相当。
含酚红和谷氨酰胺的 RPMI 1640 培养基	ThermoFisher Scientific	21875034	在 RPMI1640 中加入 MEM 非必需氨基酸、丙酮酸钠、庆大霉素、两性霉素 B 和 15% (v/v) 胎牛血清 (FBS)，配制成培养液 (CM)。
无钙、无镁、无酚红的无菌磷酸盐缓冲液 (PBS)，pH 7.4			用于手术标本的保存和运输。PBS 可替换为其他具有生理 pH 的等渗溶液。培养液最适合过夜保存。
无菌细胞培养级水
70% 乙醇溶液
用于生物废弃物处理的消毒液
无菌金属镊子或尖头镊
无菌金属剪刀
无菌平头金属称量勺
无菌手术刀及刀片
6 孔细胞培养板
无菌培养皿，100 mm × 20 mm
无细胞 HIV-1 病毒制备物 HIV-1BaL	NIH AIDS 试剂计划	510	应扩增病毒以制备足够量的病毒储备液，用于多次实验。分装病毒悬液并储存于 -80 °C。避免反复冻融。
无细胞 HIV-1 病毒制备物 HIV-1LAI.04	NIH AIDS 试剂计划	2522	应扩增病毒以制备足够量的病毒储备液，用于多次实验。分装病毒悬液并储存于 -80 °C。避免反复冻融。
无菌 1.5 和 2 mL 螺口管
设定为 37 °C 的水浴锅
生物安全柜
干式恒温振荡器，配备适用于 1.5 mL 管的加热模块，设定为 37 °C、300 rpm