皮下注射细菌抗原以在小鼠模型中诱导全身性炎症

摘要

来源：John, S. 等，启动型分枝杆菌性葡萄膜炎（PMU）作为感染后葡萄膜炎的模型 J. Vis. Exp. (2021)

本视频展示了在麻醉小鼠中诱导全身性炎症的过程。注射分枝杆菌抗原-佐剂储库可触发细胞因子释放并引发局部炎症。淋巴管开放，使免疫细胞进入淋巴结并激活T细胞，T细胞释放促炎性细胞因子，导致广泛的炎症反应。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 皮下注射抗原的制备

1. 在进行本节所有操作时，均须在化学通风橱内操作，以避免吸入或皮肤接触结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）H37Ra 菌粉。根据本机构对完全弗氏佐剂（通常为 BSL-1 级别）的管理规定进行操作，包括佩戴耐化学腐蚀手套、安全护目镜和防护工作服（实验服）。
2. 采用良好的无菌技术，防止引入实验动物的试剂受到污染。
3. 在 5 mL 微量离心管中，将 5 mg 冻干灭活的 Mycobacterium tuberculosis H37Ra 菌粉与 2.5 mL 冷的磷酸盐缓冲液（PBS）混合，配制 Mtb 悬液。涡旋振荡 30 秒后置于冰上。
4. 为在 PBS 中形成 H37Ra 的细小悬液，将悬液置于冰上超声处理 5 分钟。
   1. 松开转换器单元主体，用 70%（v/v）酒精棉片清洁探头。
   2. 开启超声仪，旋转功率调节旋钮将功率设为 4，将探头尖端浸入含有分枝杆菌菌粉的 PBS 中。确保探头尖端至少浸入样品深度的一半，且探头尖端不接触微量离心管管壁。
5. 在冰上超声处理 30 秒，暂停 30 秒，重复....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
弗氏不完全佐剂	BD Difco，新泽西州，美国	263910
H37Ra 冻干粉 分枝杆菌 提取	BD Difco，新泽西州，美国	231141
胰岛素注射针头	Exel International，美国	26029	1 mL
异氟烷
PBS	Gibco	14190
RM2255	Leica Biosystems，伊利诺伊州，美国		组织切片
结核病注射器	Becton, Dickinson and Company，新泽西州，美国	309602	1 mL
泰诺	Johnson & Johnson Consumer Inc, PA, 美国	NDC 50580-614-01	对乙酰氨基酚