一种用于脂多糖诱导炎症渗出液采集的气囊小鼠模型

摘要

来源：Lu, Q., 等 检测小鼠中性粒细胞的迁移与浸润。 J. Vis. Exp.  (2020)。

本视频介绍了在小鼠皮下组织中建立气囊并收集脂多糖刺激后炎性渗出液的操作流程 体内 本视频还涵盖了对气囊中中性粒细胞浸润的分析。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 气囊实验

1. 第一次空气注射
   1. 在第0天，将小鼠置于流速为2 L/min的5%异氟烷气体麻醉室中，麻醉3分钟，使其完全麻醉；随后将每只小鼠转移至独立呼吸装置中，以0.5 L/min流速的2%异氟烷维持麻醉状态。
      注意：在将小鼠从麻醉室转移至独立呼吸装置前，需通过夹捏脚趾确认麻醉深度。夹捏脚趾时，小鼠腿部不应出现运动反应。
   2. 使用连接在5 mL注射器上的0.22 µm滤器，抽取3 mL灭菌空气。
   3. 用镊子提起麻醉后小鼠背部皮肤，使用26 G x 3/8"针头将3 mL灭菌空气皮下注射。
   4. 处理完成后，将小鼠从呼吸装置中移出，持续观察直至其恢复活动，确保存活。
2. 第二次空气注射
   1. 在第3天，向先前建立的气囊内再注射3 mL灭菌空气，以维持气囊结构，操作方法同第1.1节所述。
3. 处理
   1. 在第6天，于处死前6小时向气囊内注射不同处理试剂。注射1 mL磷酸盐缓冲液（PBS）作为阴性对照；注射1 mL浓度为1 µg/mL的脂多糖（LPS）作为阳性对照，以诱导局部炎症反应。
   2. 将小鼠置于流速为2 L/min的5%异氟烷气体麻醉室中，麻醉3分钟，使其完全麻醉；随后将每只小鼠转移至独立呼吸装置中，以0.5 L/min流速的2%异氟烷维持麻醉状态。根据材料表配制洗涤缓冲液。
      注意：在将小鼠从麻醉室转移至独立呼吸装置前，需通过夹捏脚趾确认麻醉深度。夹捏脚趾时，小鼠腿部不应出现运动反应。
   3. 对每个气囊，先用1 mL洗涤缓冲液冲洗气囊，并将炎性渗出液收集至15 mL离心管中；随后用2 mL洗涤缓冲液重复冲洗2次，每次冲洗液均收集至同一离心管中。
   4. 在室温下以100 x g离心10分钟。弃去上清液，将细胞重悬于1 mL洗涤缓冲液中，使用全自动血液分析仪计数细胞，以定量中性粒细胞比例。
      注意：代表性结果见图1。

结果

图 1：气囊模型实验的代表性结果。 （A）气囊模型实验示意图。（B）气囊模型实验中白细胞亚群浸润的代表性结果。PBS：对照组；LPS：1 µg/mL LPS。数据以均值 ± 标准差表示。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
100% 乙醇	北京化工厂
100% 甲醇	北京化工厂
15 mL 圆锥形聚丙烯离心管	Falcon	Falcon
23 G × 1 1/4" 针头	BD	305120
26 G × 3/8" 针头	BD	305110
30 G × 1/2" 针头	BD	305106
5 mL 注射器	BD	Z683574
50 mL 圆锥形聚丙烯离心管	Falcon	14-432-22
气体麻醉系统	ZS Dichuang	ZS-MV-IV
磷酸盐缓冲液 (PBS), 1×			将 90% ddH2O 与 10% (v/v) 10×PBS 混合，高压灭菌
磷酸盐缓冲液 (PBS), 10×			将 16 g NaCl、0.4 g KCl、2.88 g Na2HPO4·2H2O、0.48 g KH2PO4（无水）溶于 200 mL ddH2O 中，调节 pH 至 7.4，高压灭菌
脂多糖 (LPS)	Sigma	L3012
气囊实验中的洗涤缓冲液			用 HBSS 将 0.5 M EDTA 稀释至 10 mM