经尿道插管与细菌接种建立雄性小鼠尿路感染模型

摘要

来源：Zychlinsky Scharff, A.，等。小型动物模型中的尿路感染：雄性和雌性小鼠的经尿道导管插入术。J. Vis. Exp. (2017)。

本视频展示了通过经尿道导管灌注在雌性小鼠膀胱中建立尿路致病性Escherichia coli感染的方法。注入的细菌可在膀胱内成功建立尿路感染，为研究与尿路相关的医疗相关疾病提供了有价值的实验平台。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 导管的制备

1. 为每组待感染的小鼠准备一个儿科静脉穿刺导管。按照制造商说明，利用内置弹簧装置将每个导管的针头卸下。丢弃针头，仅保留塑料静脉导管部分。
2. 在层流罩中对导管进行紫外线（U.V.）消毒一个周期，通常为 25 - 30 分钟。
   注意：导管可重复用于多只小鼠，但在不同实验组、不同性别或不同细菌菌株之间应使用新的导管。

2. 尿路致病性 E. coli 感染前的制备

1. 感染前至少两天，使用无菌接种环将UPEC从冷冻菌种接种至含有适当抗生素的Luria肉汤（LB）琼脂平板上。在37 °C下培养过夜。平板可在4 °C下保存最多一周。
2. 在100 ml无菌锥形瓶中，取LB琼脂平板上的单个菌落接种于10 ml含适当抗生素的LB液体培养基中，在37 °C静置培养过夜（约16–18小时）。
   注意：静置培养有利于表达I型菌毛，而I型菌毛是感染所必需的。振荡培养的菌液菌毛表达效率较低，从而导致感染率不稳定。
3. 测定过夜培养物在600 nm处的光密度（OD）₆₀₀，并利用预先确定的生长曲线计算每毫升....

结果

图1： 灌注质量与感染后24小时的细菌负荷无相关性。 6至8周龄的雌性和雄性C57Bl/6小鼠灌注10⁷ UPEC的菌落形成单位（CFU）。每次灌注后，由一名研究人员根据特定标准（框内文字）对灌注质量进行评分。感染后24小时，无菌摘除膀胱以测定细菌载量。图中显示了所评定的质量评分 与 CFU/膀胱。每个点代表一只小鼠，图中显示了5次合并的实验结果。p = 0.17，采用Kruskal-Wallis检验比较各组列均秩，事后多重比较采用Dunn's检验。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
BD Insyte Autoguard 防护型静脉导管 24 G，外径 0.7 mm，长 14 mM	BD Medical	381811 或 381411*	* 目录编号因国家而异
接种环	Greiner Bio-One	731171
注射器	B Braun	9166017V
持针钳（Adson）	Fine Science Tools	11006-12
胰岛素注射器	Terumo	BS05M2913
5 ml 聚丙烯离心管	Falcon	352063
LB Miller 肉汤	Difco	244620
LB Miller 琼脂	Difco	244520
比色皿	Bio-rad	223-9955