通过同种异体骨髓与脾细胞移植在小鼠模型中诱导移植物抗宿主病

摘要

来源：Buchele, V., 等. 小鼠体内肠道移植物抗宿主病的诱导及其微型内镜活体评估. J. Vis. Exp. (2019)。

本视频展示了如何利用同种异体造血干细胞和可诱导移植物抗宿主病（GvHD）的脾源性异反应性T淋巴细胞，在经致死剂量照射的受体小鼠中诱导肠道移植物抗宿主病。该实验方案有助于建立严重的急性肠道GvHD模型，以深入理解该疾病的发病机制，并开发创新的治疗策略。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 移植物抗宿主病（GvHD）诱导

1. 第0天: 受体小鼠的全身照射
   1. 使用至少10周大的雌性CD45.2+ H2kd+ BALB/c小鼠作为受体。
   2. 称重并记录受体小鼠在诱导移植物抗宿主病（GvHD）前的体重。
      注意： 确保受体小鼠的体重不低于20 g。初始体重将作为参考值，用于计算单只小鼠在移植物抗宿主病（GvHD）诱导和进展过程中的体重下降情况。
   3. 将最多五只小鼠放入X射线辐照仪的容器中。
   4. 采用8 Gy单次剂量的X射线对小鼠进行全身照射。使用Cs137作为辐射源。
2. 第1天：用去T细胞骨髓重建经辐照的小鼠
   注意： 同种异体骨髓细胞的移植应于照射后24小时内进行，具体操作详见第1.2节。以下步骤需在无菌细胞培养超净台中进行，并使用经过滤的试剂。采用同种异体CD45.1/Ly5.1 B6.SJL-Ptprca Pepcb以/BoyCrl小鼠作为T细胞耗竭骨髓的供体。
   1. 根据机构指南，在受体 BAL....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
BIOBEAM 2000 γ射线辐照仪	Gamma-Service Meical GmbH
磷酸盐缓冲液（PBS）	Sigma-Aldrich Co. LLC.	D8662-6x500ML
Semken 镊子（长度：13 cm；带锯齿、弯曲尖端）	Fine Science Tools	11009-13
硬化精细剪刀（长度：8.5 cm；直头；刃长：24 mm）	Fine Science Tools	14090-09
RPMI-1640 培养基	Sigma-Aldrich Co. LLC.	R8758-500ML
皮下注射针头（26G）	B. Braun Melsungen AG	4657683
1 mL 注射器	B. Braun Melsungen AG	9166017V
50 mL 离心管	Sarstedt Ag & Co.KG	6,25,47,254
带 40 µm 网筛的细胞滤器	BD Falcon	352340
带无菌内腔的胰岛素注射器（30G）	BD	324826
小鼠 Pan T 细胞分离试剂盒 II	Miltenyi Biotec GmbH	130-095-130	用于磁珠细胞分选法分离脾脏 T 细胞
小鼠 CD90.2 MicroBeads	Miltenyi Biotec GmbH	130-049-101	用于磁珠细胞分选法分离去 T 细胞的骨髓细胞
活检钳	KARL STORZ SE &Co KG	61071 ZJ	结肠镜检查实验装置的组成部分
乙二胺四乙酸二钠盐二水合物（Na2EDTA）	Carl Roth GmbH & Co.KG	8043.2	ACK 裂解缓冲液的组分
Alexa Fluor 700 标记抗小鼠 CD45.2 抗体（克隆：104；批号：B252126；RRID: AB_493731）	Biolegend	109822
PE/Cy7 标记抗小鼠 CD45.1 抗体（克隆：A20；批号：B217246；RRID: AB_1134168）	Biolegend	110730
APC/Cy7 标记抗小鼠 CD8a 抗体（克隆：53-6.7；批号：B247008；RRID: AB_312753）	Biolegend	100714
Forane / 异氟烷	AbbVie Inc.	B506
过滤牛血清	Pan Biotec	P40-47500	FACS 缓冲液的组分