利用宿主蚊媒来源的子孢子建立小鼠实验性脑型疟疾模型

摘要

来源：Hoffmann, A. 等，利用磁共振成像技术在实验性脑型疟疾模型中对水肿发展和微血管病理进行活体追踪 。 J. Vis. Exp.  (2017)

本视频展示了脑型疟疾小鼠实验模型的建立。从感染疟原虫的按蚊中分离出的子孢子被用于感染小鼠，以模拟人类脑型疟疾的病理过程。 疟原虫伯氏疟原虫将感染的雌性蚊子注入被固定的实验小鼠尾静脉，可导致血脑屏障破坏和脑部炎症，从而引发脑型疟疾。该感染小鼠模型为研究脑型疟疾提供了重要的工具 体内 与脑型疟疾相关的微血管病变

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 感染

1. 通过让按蚊（Anopheles stephensi）在配子体血症小鼠身上吸血15分钟，使其感染伯氏疟原虫（Plasmodium berghei）ANKA株。将感染后的蚊子置于80%湿度和21 °C条件下饲养。
2. 在吸血后17至22天，从蚊笼中收集雌性蚊子。将其置于冰上以麻醉。
3. 使用镊子将三到四只蚊子放置于载玻片上，载玻片上预先滴加一滴冷的RPMI培养基。将载玻片置于显微镜下。
4. 用镊子小心地拉伸蚊子的头部与身体之间部位，使用注射器和针头分离唾液腺。对剩余蚊子重复此操作。
5. 用玻璃移液管吸取载玻片上的唾液腺，并收集至1.5 mL离心管中。
   注意：根据感染率的不同，通常每对唾液腺可获得8,000至15,000个具有感染性的子孢子。
6. 在离心管中使用小型塑料棒剧烈研磨分离的唾液腺约3分钟，以从唾液腺组织中释放子孢子。
7. 在1,000 × g和4 °C条件下离心3分钟，以从残留组织中纯化子孢子。
8. 将含有子孢子（SPZ）的上清液用移液器转移至新的离心管中，并使用Neubauer血细胞计数板对纯化的子孢子进行计数。
9. 通过添加磷酸盐缓冲液（PBS），将纯化子孢子的浓度调整至10,000/mL。
10. 向近交系C57BL/6小鼠尾静脉注射总共1,000个子孢子（0.1 mL）以启动感染。为便于注射，将C57BL/6小鼠放入固定器中，并将尾巴浸入温水（约37 °C）中，以帮助显现尾静脉。
    注意：注射过程本身很短暂，可在数秒内完成。
11. 从子孢子感染后的第3天开始，每天一次通过血涂片检测血液期寄生虫血症水平。
12. 从子孢子注射后第5天起，每天使用快速小鼠昏迷与行为评分（RMCBS）对小鼠进行评估。
13. 根据快速小鼠昏迷与行为评分（RMCBS）结果及拟研究的科学问题，对小鼠进行磁共振成像（MRI）检查。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
异氟烷	Baxter	1001747	用于麻醉
Dotarem	Guebert	1086923	Gd-DTPA 造影剂；0.5 mmol/ml
Amira（图像处理程序）	FEI 公司		Amira 5.3.2 版本
MATLAB	The MathWorks, Inc.		发布版本 2012b
FDT 工具箱	FMRIB 软件库