使用宿主蚊子孢子生成实验性脑疟疾小鼠模型

Abstract

来源:Hoffmann， A. et al.， 使用磁共振成像在实验性脑疟疾模型中对水肿发展和微血管病理的体内跟踪。J. Vis. Exp.（2017 年）

该视频演示了脑疟疾实验小鼠模型的生成。从伯氏疟原虫感染的雌性蚊子中分离出的子孢子被注射到受束缚的小鼠尾静脉中，导致血脑屏障破坏和脑部炎症，从而导致脑疟疾。这种感染的小鼠模型为研究与脑疟疾相关的体内微血管病理提供了有价值的工具。

Protocol

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 感染

1. 通过在配子细胞小鼠上喂食伯氏疟原虫 ANKA 15 分钟，用伯氏疟原虫 ANKA 感染按蚊。将受感染的蚊子保持在 80% 湿度和 21 °C 的温度下。
吸
2. 血后 17 至 22 天从笼子中收集雌性蚊子。将它们放在冰上麻醉它们。
3. 使用镊子，将三到四只蚊子放在覆盖有一滴冷 RPMI 培养基的载玻片上。将载玻片置于显微镜下。
4. 使用镊子小心地将蚊子在头部和身体之间拉伸。使用注射器和针头隔离唾液腺。对剩余的蚊子重复此过程。
5. 用玻璃移液管吸取唾液腺，并将其收集在 1.5 mL 离心管中，从载玻片中收集唾液腺><。 注意:根据感染率，通常每个唾液腺可以获得 8,000 至 15,000 个感染性子孢子。
6. 大约 3 分钟，用小塑料棒粉碎离心管内分离的唾液腺，以将子孢子与唾液腺组织分离。
7. 在 1,000 x g 和 4 °C 下离心 3 分钟，以从剩余组织中纯化子孢子。
8. 将含有子孢子 （SPZ） 的上清液移液到新的离心管中，并在 Neubauer 血细胞计数器中计数纯化的子孢子。
9. 通过添加磷酸盐缓冲盐水，将纯化的子孢子的浓度调节至 10,000/mL。
将
10. 总共 1,000 个子孢子 （0.1 mL） 注射到近交 C57BL/6 小鼠的尾静脉中以引发感染。为了便于注射，将 C57BL/6 小鼠置于限制器中，并将尾巴放入温水（约 37 °C）中，以帮助尾静脉可视化><。 注意:注射本身是一个简短的过程，可以在几秒钟内完成。
11. 从 SPZ 感染后第 3 天开始，每天一次检查血涂片上的血期寄生虫血症。
12. 从子孢子注射后第 5 天开始，每天一次使用快速小鼠昏迷和行为量表 （RMCBS） 评分评估小鼠。
13. 根据快速小鼠昏迷和行为量表 （RMCBS） 评分和要解决的研究问题，用磁共振成像 （MRI） 成像评估小鼠。

Materials