一种通过喷雾接种法在水稻叶片上建立真菌感染的技术

摘要

来源：Zhang, M., 等. 植物感染试验：喷雾与伤口介导接种植物病原菌Magnaporthe Grisea。J. Vis. Exp. (2018)。

本视频演示了一种在水稻叶片上建立稻瘟病菌Magnaporthe grisea感染的技术。将真菌分生孢子悬浮液喷洒至水稻叶片区域，通过评估坏死病斑的形成情况来判断病害发展程度。

方案

1. 使用稻瘟病菌（M. grisea）分生孢子悬浮液进行喷雾接种

1. 稻瘟病菌（M. grisea）的真菌培养
   1. 制备燕麦番茄琼脂（OTA）培养基用于真菌菌株培养。
   2. 称取30–50 g燕麦片，加入800 mL去离子水（ddH₂O），在电热锅中煮沸30分钟。
   3. 用纱布过滤煮沸后的燕麦汁至烧杯中。
   4. 向烧杯中的滤液加入150 mL番茄汁和20 g琼脂，并用ddH₂O定容至1,000 mL。
2. 实验材料的准备
   1. 将约50粒水稻（Oryza sativa）品种丽江新团黑谷（LTH）种子在ddH₂O中浸泡3天，或约50粒大麦（Hordeum vulgare cv Golden Promise）种子在ddH₂O中浸泡约1天。
   2. 将水稻或大麦种子用湿润纱布包裹，置于约30个直径为10 cm × 10 cm的培养皿中的湿润滤纸上，在28 °C条件下萌发。水稻种子萌发时间约为2–3天，大麦种子萌发时间约为2天。温室相对湿度约为70%。
   3. 将水稻或大麦幼苗种植于经高压灭菌的盆栽土中，....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
琼脂	AOBOX Biotechnology (中国)	01-023
滤纸	GE Healthcare 品牌 (瑞典)	10311387
50 mL 离心管	CORNING (美国)	430290
离心机	Eppendorf (美国)	5804R
Tween-20	Coolaber (中国)	CT11551-100ml
培养皿	Thermofisher (美国)	150326
0.5–5 mL 移液器	Eppendorf	4920000105
100–1000 µL 移液器	Eppendorf	4920000083
真空泵	Leybold	D25B
培养箱	MEMMERT	PYX313
接种环	Greiner Bio One	731175