成年斑马鱼口服插管给药实验方法

摘要

来源：Ji, J., Thwaite, R. 等. 成年斑马鱼的口服插管：一种评估生物活性化合物肠道吸收的模型. J. Vis. Exp. (2018).

本视频展示了一种对成年斑马鱼进行经口插管的技术，用于将实验性化合物递送至食管，并监测其在肠道内的吸收情况。该方法为研究口服预防药物或其他化合物在肠道内的动态过程提供了一个有价值的模型。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核

1. 所需溶液

1. 使用饲养斑马鱼的水族箱水配制 150 mg/L（用于麻醉）或 300 mg/L（用于安乐死）的氨基甲酸乙酯甲磺酸盐（MS-222）溶液。取 1 L 麻醉液注入小容器中，并持续供气。
2. 另取一小型容器，加入 1 L 不含 MS-222 的水族箱水用于鱼类复苏，并持续供气。
3. 用 10x 无菌储备液配制 50 mL 的 1x PBS 缓冲液。
4. 为进行流式细胞分析或肠道细胞分离，使用胶原酶 IV 型粉末或储备液，在含 1% v/v 青霉素-链霉素的杜氏改良伊格尔培养基（DMEM）中新鲜配制足够量的 0.15% 胶原酶 IV 型溶液（每条鱼 1 mL）。将溶液分装至 2 mL 离心管中（每管 1 mL，对应一条鱼）。在解剖前 30 分钟取出，此前保持 4 °C 保存。
5. 为共聚焦显微镜观察或样本固定，于通风橱内用 PBS 新鲜配制 50 mL 的 4% 多聚甲醛（PFA）溶液，或从 -20 °C 冰箱中取出储备液在通风橱内解冻。
   注意：PFA 具有毒性。操作前请仔细阅读材料安全数据表。操作时应佩戴手套和护目镜，所有溶液操作均须在通风橱内进行。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
硅胶管	Dow Corning	508-001	内径 0.30 mm，外径 0.64 mm
鲁尔锁针头	Hamilton	7750-22	31 G，Kel-F 接头
鲁尔锁注射器	Hamilton	81020/01	100 μL，Kel-F 接头
带滤芯移液器吸头	Nerbe Plus	07-613-8300	10 μL
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	粉末
10x PBS	Sigma Aldrich	P5493
滤纸	Filter-Lab	RM14034252
Atto-488 NHS 酯	Sigma-Aldrich	41698
DMEM	Gibco	31966	杜氏改良伊格尔培养基
Maxwell RSC simplyRNA 组织试剂盒	Promega	AS1340