在免疫功能健全的啮齿类动物模型中支气管内接种Streptococcus pneumoniae

摘要

来源：Hoover, J. L.，等，在免疫功能健全的啮齿类动物中建立稳健的肺炎模型以评估针对S. pneumoniae、H. influenzae、K. pneumoniae、P. aeruginosa或A. baumannii的抗菌疗效。J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了在免疫功能健全的啮齿类动物模型中建立肺部感染的方法 通过 气管插管并将细菌悬液注入肺叶。该模型可用于免疫功能健全动物的抗菌疗效研究。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 麻醉、插管并接种动物

注意： 建议使用体重为100–120 g的SPF级免疫功能健全的雄性Sprague-Dawley大鼠。为所有动物提供食物和水 随意摄取 在木屑或其他吸水性垫料上群养，并维持标准的12小时光照-12小时黑暗循环。

1. 在开展任何实验之前，获取并灭菌适用于该动物物种的适当尺寸的金属套管和聚乙烯导管。准备无菌的一次性1 mL注射器和无菌的一次性25号针头。
   注意： 务必将这些注射器和针头丢弃至锐器容器中。
   1. 对于大鼠，购买或自制一根长约12 cm、内径0.9–1.0 mm、外径1.0–1.2 mm的金属套管，其一端弯曲成约45°角。取一段11至12英寸长的聚乙烯管，内径0.4 mm，外径0.8 mm。（参见 图1A。)
   2. 将金属套管置于带螺口盖的玻璃管中，通过标准方法进行高压灭菌以实现消毒。将切割好的聚乙烯导管段浸泡并保存在盛有酒精的带盖烧杯中。
2. 准备操作台面和插管装置。
   1. 将一块干净的一次性垫子放置在靠近水浴的工作....

结果

图1： 非手术性气管内插管。 图中展示了用于大鼠(A)和小鼠(B)的插管工具。动物麻醉后，应按图C所示体位放置，若操作者为右利手，则头部朝右，尾部朝左。将左手食指轻轻置于喉部，以触诊气管软骨环，确认套管位置正确。接种物应注入左肺深部，如大鼠肺的腹面观所示(D)。样本经连续稀释并接种于琼脂平板后，菌落生长情况应与图E所示相似。图1D，版权 © Gill Smith [《实验动物》，第25卷（1991年），G. Smith，《建立大鼠呼吸道感染的简易非手术.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
引导工具	Intek Services Ltd	GT01
1 mL TB 注射器滑动接头	Becton Dickinson and Company	309659
PrecisionGlide 针头 25 G x 5/8	Becton Dickinson and Company	305122
Intramedic 聚乙烯导管	Clay Adams 品牌 - Becton Dickinson and Company	427401	小鼠用塑料套管
动物饲喂针头 - 直型 20 x 3" 2-1/4	Popper and Sons, Inc	7903	用于制作小鼠金属套管
75 TN 5.0 µL 注射器 26s/2"/2	Hamilton	87930	HPLC 玻璃进样注射器
Difco 营养琼脂	Becton Dickinson and Company	213000
Pyrex 试管，培养用 25x150 带螺帽并衬橡胶垫圈	Corning	9825-25	用于金属套管的高压灭菌/储存
PrecisionGlide 针头 25 G x 5/8	Becton Dickinson and Company	305122
70% 异丙醇	Vi-Jon (Swan)	NDC 0869-0810-43
异氟烷，USP	Piramal Healthcare	NDC 66794-013-10
50 mL 聚丙烯圆锥形离心管 30 x 115 mm	Falcon, a Corning Brand	352070
75 TN 5.0 µL 注射器 26s/2"/2	Hamilton	87930	HPLC 玻璃进样注射器