大鼠模型中肠系膜淋巴管插管采集淋巴液

摘要

来源：Trevaskis, N. L.，等。肠系膜淋巴导管插管大鼠模型：用于评估肠道淋巴药物转运。J. Vis. Exp. (2015)。

本视频演示了一种在大鼠中对肠系膜淋巴管进行插管的技术。该方法能够直接获取淋巴液中所含的所有组分的全部体积。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 肠系膜淋巴管插管

1. 将动物置于右侧朝向操作者的位置。根据需要，在有或无手术显微镜辅助的情况下进行手术。
2. 使用无菌手术刀片沿中线（剑突）至右侧腹 flank 区、距肋缘下方约 2 cm 处，做一条长约 4 cm 的直线切口，切开腹壁肌肉的最表层（见图 1B）。
3. 使用小型手术剪，从距中线外侧 4–5 mm 处开始，向右侧 flank 区方向逐层剪开腹壁肌肉的其余层次（见图 1B）。
4. 将小肠向左上方牵拉，并置于左侧腹壁肌肉下方，用 2–3 块浸有生理盐水的无菌纱布覆盖并固定。
5. 将大鼠背部置于一支水平放置的 10 ml 塑料注射器上，位置与右肾平齐，以利于更好地观察肠系膜淋巴管。
6. 定位肠系膜上淋巴管：该血管直径约为 0.5–1 mm，垂直于右肾，位于肠系膜动脉的前方且与之平行（肠系膜动脉为一条搏动性的深红色血管；见图 1C）。
   注意：在未禁食或预先给予油脂的大鼠中，该血管呈白色、不透明，较禁食大鼠中更为清晰易见，后者中血管几乎呈透明状。
7. 检查肠系膜上淋巴管和肠系膜动脉后方区域，判断是否存在第二条较小的副淋巴管。若存在，可通过切断该管并用超级胶水封闭，或在其周围结扎缝线的方式阻断其淋巴液流动，以确保所有来自肠道的淋巴液均从肠系膜上淋巴管收集。
8. 将一对直头镊子穿过右肾下缘的肾周脂肪层，并继续穿过下腔静脉正下方的结缔组织层，行进方向与肠系膜上淋巴管平行。
9. 用镊子尖端夹住淋巴导管插管的一端，将其从肾周脂肪层中穿过，使插管一端紧邻肠系膜淋巴管，另一端从动物体表右肾水平处引出。
10. 通过钝性分离法，去除覆盖在肠系膜淋巴管表面的结缔组织和脂肪组织，暴露淋巴管。操作时注意避免穿破或损伤淋巴管。
11. 在分离出淋巴管后，使用显微剪刀、精细镊子的尖端或 25 G 针头在淋巴管壁上刺一个小孔。注意不要完全切断血管。
12. 确保淋巴插管内已完全充满抗凝剂溶液（使用注射器和 25 G 针头灌注），不得留有气泡。在小型镊子辅助下，将插管经小孔插入肠系膜淋巴管内约 2–4 mm。
13. 观察插管数分钟。若插管成功，可见肠淋巴液从插管的自由端逐渐流出。若插管失败，请重复步骤 1.8–1.12。
14. 若插管成功，可在淋巴管入口处滴加少量兽用粘合剂，以固定插管。注意避免使用过多粘合剂导致血管阻塞。
15. 在等待兽用粘合剂固化期间，持续观察淋巴液流动数分钟，确认插管通畅有效。确认插管成功后，小心移除腹腔内的纱布，并将小肠复位至原始解剖位置。
16. 预先称量淋巴收集管，标记用于淋巴液和血液样本收集的试管，并加入抗凝剂溶液。加入足量抗凝剂，使终浓度达到：EDTA 在无菌水中为 1 mg/ml，或在收集的淋巴液或血液中肝素浓度为 10–20 IU/ml。
17. 将含有抗凝剂的淋巴收集管（见步骤 1.16）连接至插管末端，用于收集自由流出的淋巴液。
18. 随后，对十二指肠进行插管，以便输注再水化溶液和/或制剂。

结果

图1. (A) 腹部剃毛以备插管淋巴管，(B) 沿中线至右侧腹侧做一4 cm直线切口，打开腹壁肌肉以暴露淋巴管，以及(C) 位于右肾垂直方向的肠系膜上淋巴管（黄色圆圈标示）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
无菌生理盐水	Baxter healthcare	AHB 1307	可使用任意品牌。此处示例为 Baxter 100 ml 生理盐水袋，每盒 50 袋
70% 乙醇水溶液	任意		可使用任意品牌
氯己定葡萄糖酸盐溶液（Microshield 4）	Livingstone International	JJ60243L	可使用任意品牌。http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L
聚维酮碘溶液	Livingstone International	BU0510	可使用任意品牌。http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =BU0510
Ilium Ketamil（氯胺酮 100 mg/ml）	PROVET VICTORIA	KETA I 1	http://www.provet.vom.au
肝素（35000 I.U. / 35 mL）	SigmaPharmaceuticals	337220	http://www.sigmaco.com.au
聚乙烯（PE）导管，外径 0.96 mm × 内径 0.58 mm	Microtube extensions	PE8050	可使用任意品牌。此处示例为 PE 管，0.96 × 0.58 mm，30 m
聚乙烯（PE）导管，外径 0.8 mm × 内径 0.5 mm	Microtube extensions	PE9658	可使用任意品牌。此处示例为 PE 管，0.8 × 0.5 mm，30 m
标记笔	任意		可使用任意品牌
兽用粘合剂	任意		可使用任意品牌
23 号针头	Livingstone International	DN23GX0.75LV	可使用任意品牌。此处示例为 Livingstone 一次性针头，无菌，23GX0.75 英寸，100 支/盒。http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT= 6&search=DN23GX0.75LV
25 号针头	Livingstone International	DN25GX1.0LV	可使用任意品牌。此处示例为 Livingstone 一次性针头，无菌，25GX1.0 英寸，100 支/盒。http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV
1 ml 注射器	Livingstone International	T3SS01TA	可使用任意品牌。此处示例为 Terumo 1 ml 滑动式结核菌素注射器，100 支/盒。http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
10 ml 注射器	Livingstone International	T3SS10SA	可使用任意品牌。此处示例为 Terumo 10 ml 滑动式注射器，100 支/盒。http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
纱布敷料	Livingstone International	GSC075	可使用任意品牌，并裁剪至所需尺寸。此处示例为棉芯纱布敷料，7.5×7.5 cm，8 层。http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
加热垫	Ratek	WT1	可使用任何能维持 37°C 温度的品牌。此处示例为 Ratek 加热托盘。
手术显微镜	Zeiss	495005-0014-000	可使用任意品牌。此处示例为 Zeiss Stemi 2000-C 体视显微镜，配 S 型双点支架和 KL 300 LED 光源。https:// www.micro-shop.zeiss.com/? l=en&p=us&f=e&i=10143
1 把小型手术剪刀	Fine Science Tools (FST)	14060-09	可使用任意品牌。此处示例为 FST 精细剪刀，9 cm，21 mm 刃口，锋利，直型。http://www.finescience.ca/ Special-Pages/Products.aspx? ProductId=40&CategoryId=17
2 把带锯齿弯头镊子	Fine Science Tools (FST)	11001-13	可使用任意品牌。此处示例为 FST 13 cm 标准型镊子，弯头尺寸 2.8×1.4 mm。http://www.finescience.ca/ Special-Pages/Products.aspx? ProductId=405&CategoryId=32