建立胸膜播散性肺癌小鼠模型

摘要

来源：Yasui, H.，等。近红外光免疫疗法用于胸膜播散小鼠模型的研究。J. Vis. Exp. (2021)

本视频演示了一种通过将肺癌细胞悬液注射到免疫缺陷小鼠胸腔内，以建立胸膜播散小鼠模型的方法。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 胸膜播散模型的建立

1. 制备表达荧光素酶的靶细胞，并将细胞重悬于 1.0 × 10⁶ 100 µL 磷酸盐缓冲液（PBS）中的靶细胞
   注意： 胸腔内癌细胞，例如肺癌和恶性胸膜间皮瘤（MPM）细胞，适合作为靶细胞。制备表达荧光素酶的细胞 通过 荧光素酶基因转染，并在之后确认了荧光素酶的高表达 > 10 代细胞传代。细胞培养于添加了10%胎牛血清、青霉素（100 IU/mL）和链霉素（100 mg/mL）的培养基中。根据肿瘤生长速率和治疗时间进程调整细胞数量（1.0 × 10⁵-6.0 × 10⁶ 细胞/体重
2. 准备8至12周龄的雌性纯合型裸鼠（athymic nude mice），理想体重为19–21 g。
3. 使用异氟烷麻醉小鼠（诱导：4-5%，维持：2-3%）；用镊子夹住尾巴以确认无反应。
4. 用聚苯乙烯泡沫制作一个塞子，并将该塞子连接到30 G针头上，使针尖露出5 mm，以防止肺损伤。使用经70%乙醇清洁过的干净镊子或将其抵住经70%乙醇清洁过的硬物，将针尖弯曲，以避免气胸。图1).
   警告： 注意不要刺伤自己。使用镊子弯曲针头。将针头与胶塞连接时，不要用手直接握住胶塞。在将细胞装入注射器之前，先将胶塞插入针头更为安全。
5. 用目标细胞填充一支1 mL注射器，并安装带有堵头的30G针头。
6. 用70%乙醇对动物胸部进行消毒后再进行操作。
7. 通过肋间隙将针头刺入小鼠胸腔。由于针尖触及肋骨时遇到阻力，导致针尖上下移动。穿过肋间隙后，将注射器紧压小鼠身体并注入100 µL目标细胞（图2).
   注意： 当针头正确进入胸腔时，小鼠会出现深呼吸。通过弯曲针尖，可避免气胸以及细胞误注入肺组织。
   注意： 建议进行右侧胸壁穿刺，以避免心脏壁穿刺的风险。
8. 滚动小鼠2-3次，使细胞在胸腔内均匀分布。
9. 将小鼠放回干净且温暖的笼子中，并持续观察直至其能够自主活动。手术后，小鼠会从麻醉状态中苏醒并恢复正常行为。

结果

图1：用于细胞移植的简易手工装置。 将由聚苯乙烯泡沫制成的塞子连接到30G针头上，使针尖露出5 mm。应将针头尖端弯曲，以避免气胸的发生。

图 2：将靶细胞注射至胸腔。 将小鼠侧放，将针头朝向肺部刺...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1 mL 注射器	TERUMO	SS-01T	用于小鼠实验
30G 针头	Nipro	1907613	用于小鼠实验
BALB/cSlc-nu/nu	Japan SLC
D-荧光素（钾盐）	Cayman Chemical	14681	用于生物发光成像和DLIT
异氟烷	Wako	095-06573	用于小鼠麻醉
含酚红的0.25 w/v% 胰蛋白酶-1 mmol/L EDTA 4Na 溶液	Wako	209-016941	用于细胞培养
含L-谷氨酰胺和酚红的RPMI-1640培养基	Wako	189-02025	用于细胞培养