一种在大鼠中诱导慢性实验性自身免疫性干眼症的技术

摘要

来源：Hou, A., 等 一种具有眼组织效应记忆T细胞增加的慢性自身免疫性干眼大鼠模型。J. Vis. Exp. (2017)。

本视频展示了一种在大鼠中诱导慢性实验性自身免疫性干眼病的技术。通过在预定时间间隔向大鼠注射含有自身抗原和外来抗原的抗原-佐剂乳剂，随后将相同抗原注射至眼部表面组织，可在免疫大鼠中诱导产生慢性眼表炎症。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 泪腺提取物的制备

注意：大鼠通过腹腔注射氯胺酮（75 mg/kg）和赛拉嗪（10 mg/kg）进行麻醉。通过夹捏脚趾和尾部确认麻醉效果。每次操作后，向大鼠眼部涂抹眼用凝胶以防止角膜干燥。麻醉后的大鼠置于远红外灯下保温，直至完全恢复意识。在操作过程及恢复期间，研究人员对动物进行密切监测。所有材料和手术器械在使用前均保持无菌状态。实验结束时，通过腹腔注射戊巴比妥（80 mg/kg）实施安乐死。通过检测无心搏及触碰眼球无眨眼反射来确认安乐死完成。大鼠饲养于标准环境中：室温21–23 °C，相对湿度30–70%，光照-黑暗循环为12小时交替（上午7点至晚上7点）。

1. 将安乐死的雌性Sprague-Dawley大鼠（年龄范围为8至16周）平放，一耳紧贴桌面，另一耳朝上。用弹簧剪刀在暴露的耳下沿头尾方向做一条10 mm的切口。从周围结缔组织及排液管中分离，取出泪腺。
   1. 将腺体储存于-80 °C，直至使用。在冰上解冻腺体，并在冰上用剪刀尽可能剪碎。每份泪腺加入150 µL含1×蛋白酶抑制剂的PBS。
2. 将样品置于冰上，用超声波破碎仪在20 kHz、30....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
试剂
蛋白酶抑制剂混合物	西格玛奥德里奇	货号 P2714-1BTL
Pierce BCA 蛋白检测试剂盒	热成像科学	23227
结核分枝杆菌 H37Ra	Becton， Dickinson and company	231141
完成弗洛伊德氏副剂	Becton， Dickinson and company	231131
ovalbumin	西格玛奥德里奇	货号 A5503-10G
不完整的弗洛伊德氏佐剂	西格玛奥德里奇	F5506-6X10ML
百日咳毒素	西格玛奥德里奇	货号 P7208-50UG
荧光素钠溶液	Bausch & Lomb 英国有限公司	NA
设备
超声波仪	音速	Vibra-Cell
微型 IV 显微镜	凤凰研究实验室	不适用