自身免疫性干眼大鼠模型中角膜与泪膜光滑度的评估

摘要

来源：Hou, A. 等，一种具有眼组织效应记忆T细胞增加的慢性自身免疫性干眼大鼠模型 J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了一种在自身免疫性大鼠模型中评估角膜光滑度和泪膜稳定性的方法。该方法强调了腺体功能障碍对泪膜稳定性的影响，对于理解干眼症具有重要意义。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 泪腺提取物的制备

注意： 大鼠通过腹腔注射氯胺酮（75 mg/kg）和赛拉嗪（10 mg/kg）进行麻醉。通过夹捏脚趾和尾部确认麻醉效果。每次操作后，向大鼠眼部涂抹眼用凝胶以防止角膜干燥。麻醉后的大鼠置于远红外线灯下保温，直至完全恢复意识。在实验操作及恢复期间，研究人员对动物进行密切监测。所有材料和手术器械在使用前均保持无菌状态。实验结束时，通过腹腔注射戊巴比妥（80 mg/kg）对大鼠实施安乐死。通过无心跳脉搏及无角膜反射确认安乐死完成 通过触碰眼球引出眨眼反射。大鼠饲养于标准环境中：室温21-23 °C；相对湿度30-70%；明暗循环周期，交替12小时（上午7点至晚上7点）。

1. 将安乐死的雌性Sprague-Dawley大鼠（年龄范围为8至16周）平放，一耳紧贴桌面，另一耳朝上。用弹簧剪刀在暴露的耳下沿头尾方向做一条10 mm的切口。从周围结缔组织及排液管中分离，取出泪腺。
   1. 将腺体储存于-80 °C，直至使用。在冰上解冻腺体，并在冰上用剪刀尽可能剪碎。每份泪腺加入150 µL含1×蛋白酶抑制剂的磷酸盐缓冲液（PBS）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
试剂
蛋白酶抑制剂混合物	Sigma-Aldrich	P2714-1BTL
Pierce BCA 蛋白定量检测试剂盒	Thermal Scientific	23227
Mycobacterium tuberculosis H37Ra	Becton, Dickinson and company	231141
完全弗氏佐剂	Becton, Dickinson and company	231131
卵清蛋白	Sigma-Aldrich	A5503-10G
不完全弗氏佐剂	Sigma-Aldrich	F5506-6X10ML
百日咳毒素	Sigma-Aldrich	P7208-50UG
仪器设备
超声破碎仪	Sonics	Vibra-Cell
带环形光源照明和相机的体视显微镜	Carl Zeiss	NA