荧光素染色在自身免疫性干眼大鼠模型中评估角膜损伤

摘要

来源：Hou Ahiua，等。一种具有眼组织效应记忆T细胞增加的慢性自身免疫性干眼大鼠模型。J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了使用荧光素染料对受损角膜进行染色，以评估大鼠模型中自身免疫性干眼病的严重程度。染色后胶原纤维呈现的绿色荧光斑点表明角膜上皮细胞受损。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 干眼症特征的评估

采用荧光素染色法测量角膜损伤。

1. 向大鼠角膜中加入 2 µL 的 0.2% 荧光素。用戴手套的手指被动开合大鼠眼睑 3 次，使荧光素染料均匀分布在眼球表面。
2. 1分钟后，用3 mL注射器（不带针头）吸取1 mL生理盐水，将注射器置于角膜前约2-3 mm处，轻轻将生理盐水推注到眼睛表面。
3. 在钴蓝滤光镜下采集图像（即， ~400 nm）的成像显微镜在关闭背景光条件下进行眼部成像。
   注意： 随后采用基于先前文献修改的评分系统对图像进行分析。根据绿色斑点的数量、面积和强度，由观察者主观将其评分分为0到2分：0分表示无绿色斑点，1分表示少于50个点状染色，2分表示多于50个点状染色。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
试剂
荧光素钠溶液	Bausch & Lomb U.K Limited	NA
设备
带环形光源照明器和相机的体视显微镜	Carl Zeiss	NA