小鼠模型中实验性自身免疫性脑脊髓炎的诱导

摘要

来源：Barthelmes, J. 等，小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的诱导及疾病依赖性免疫细胞在不同组织中分布的评估 J. Vis. Exp.  （2016）

该视频展示了通过注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白与灭活的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）混合物，在小鼠模型中诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎的方法。该模型可帮助研究人员研究疾病机制并测试治疗干预手段。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 实验性自身免疫性脑脊髓炎或 EAE 模型

1. 诱导EAE模型
   1. 使用10至13周龄的雌性129S4/SvJae×C57BL/6小鼠进行EAE模型的诱导。
   2. 将致脑炎性MOG_{35 - 55} （髓鞘少突胶质细胞糖蛋白）肽（200 µg）用含400 µg Mycobacterium tuberculosis的200 µl完全弗氏佐剂（CFA）乳化后，皮下注射至小鼠背部上部和下部。
      注意：作为阴性、非致病性的假处理对照，可使用相同体积、相同途径给予不含抗原但含 Mycobacterium tuberculosis的不完全弗氏佐剂。
   3. 初次注射后，以及24小时后再次给予百日咳毒素腹腔注射（每次总量0.2 µg，溶于200 µl磷酸盐缓冲液PBS中）。以未经处理的小鼠作为对照组，以便将患病动物与健康动物进行比较。
      注意：也可采用以下方案诱导EAE：MOG_{35 - 55} 肽200 - 300 µg，CFA中含 Mycobacterium tuberculosis 300 - 500 µg，每次注射给予百日咳毒素0.2 - 0.3 µg，注射体积为0.1 - 0.2 ml。
   4. 从注射后一周开始，每日观察小鼠的临床症状（见步骤1.2.1）
      注意：疾病发作时间在不同实验中可能有所差异，但在本实验室条件下通常约为第11天，因此本文中第14天定义为发病后第3天。本研究中所有小鼠均出现了临床症状。

2. 小鼠评分

1. 根据临床评分对临床症状进行分类，具体如下：0）无症状，0.5）尾巴远端麻痹，1）尾巴完全麻痹，1.5）尾巴无力且后肢轻度虚弱，2）尾巴无力且后肢重度虚弱，2.5）尾巴无力且一只后肢麻痹，3）尾巴无力且双侧后肢麻痹，3.5）双侧后肢麻痹并伴随一侧前肢虚弱（达到此评分的小鼠将依据当地伦理指南实施安乐死）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
EAE试剂盒	Hooke Laboratories, Lawrence, USA	EK2110