通过显微注射致病菌建立胃类器官感染模型

摘要

来源：Bartfeld, S. 等. 类器官作为感染性疾病的模型：人和小鼠胃类器官的培养及幽门螺杆菌的显微注射. J. Vis. Exp.(2015)。

本视频展示了一种通过将胃部病原体Helicobacter pylori微量注射到类器官腔内，建立胃类器官感染模型的方法。该模型有助于研究感染诱导的胃细胞变化。

方案

1. 类器官培养物的传代

1. 向孔中的基质胶中加入 1 ml 冷的基础培养基。使用 1 ml 微量移液器，剧烈吹打直至基质胶完全破碎，然后转移至 15 ml 离心管中。置于冰上。
2. 用移液器吸取类器官，剧烈吹打 10 次。可通过肉眼观察到类器官的破碎情况。

2. 类器官培养物的显微注射。

注意：本方案可用于将细菌显微注射至类器官中。建议开始注射时选用对显微注射通透性较高的类器官。例如，小鼠胃类器官可生长为体积较大的囊状类器官，易于靶向操作。

1. 材料准备
   1. 根据制造商的建议，使用微量移液器拉制仪将玻璃毛细管拉制成两根注射针。微量移液器拉制仪会在玻璃毛细管中部加热，并将其拉断为两部分，从而生成两根玻璃针。建议同时拉制多根针头，并将其保存在洁净的培养皿中备用。
   2. 为允许细菌感染，需至少经过三次换液（即一周时间）去除所有培养基中的抗生素，以稀释基底膜基质中的抗生素残留。若使用对特定抗生素具有抗性的菌株，可添加该特定抗生素以降低污染风险。
   3. 准备显微注射工作台。在不同生物安全等级下操作时，可能需要将体视显微镜置于无菌操作台内。本实验方案中，在无菌操作台内的体视显微....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
培养基
HEPES	Invitrogen	15630-056
Advanced DMEM/F12	Invitrogen	12634-028
Matrigel, GFR, 无酚红	BD	356231
GlutaMAX	Invitrogen	35050-079	储存液浓度 200 mM，终浓度 2 mM
B27	Invitrogen	17504-044	储存液浓度 50 x，终浓度 1x
N-乙酰半胱氨酸	Sigma-Aldrich	A9165-5G	储存液浓度 500 mM，终浓度 1 mM
小鼠重组 EGF	Invitrogen	PMG8043	储存液浓度 500 µg/ml，终浓度 50 ng/ml
人重组 FGF10	Peprotech	100-26	储存液浓度 100 µg/ml，终浓度 200 ng/ml
镊子	Neolabs	2-1033	尖端精细的镊子有助于去除组织上的肌层。
4 孔培养板	Thermo Scientific	144444	可使用其他类型的多孔培养板。此类培养板特别适用于显微注射，因其外缘较低，便于操作器移动。
显微注射仪	Narishige	IM-5B
体视显微镜	Leica	MZ75
微量移液器拉制仪	Sutter Instruments	Flaming Brown Micropipette Puller
抗 Cag A 抗体	Santa Cruz	sc-25766