一种用于研究厌氧菌-宿主细胞相互作用的细菌感染检测方法

摘要

来源：Wunsch, C. M., 等 牙龈卟啉单胞菌 作为评估厌氧菌与宿主细胞相互作用的模式生物。 J. Vis. Exp. (2015)

本视频演示了一种评估厌氧致病菌Porphyromonas gingivalis黏附并侵入人脐静脉内皮细胞（HUVECs）能力的技术。在用细菌感染宿主细胞后，裂解宿主细胞以释放黏附和内化于其中的细菌。将裂解液接种至适当的培养基中，若出现菌落，则表明细菌与宿主细胞之间发生了成功的相互作用。

方案

以下方案将描述培养和研究厌氧菌种P. gingivalis侵袭的方法；然而，这些方案也可用于多种其他厌氧致病菌。尽管本方案使用了HUVECs，但也可适用于其他真核细胞，包括免疫性和非免疫性细胞。

1. 厌氧培养箱的使用与维护

注意：P. gingivalis 是一种对空气中正常氧浓度敏感的厌氧菌。培养 P. gingivalis 必须具备可控的厌氧环境。

1. 在此，于乙烯厌氧培养箱内维持一种指定为混合厌氧气体（80% N₂、10% H₂、10% CO₂）的人工环境（图1A）。使用气闸室（图1B）将物品从实验室环境转移至厌氧培养箱内。气闸室需手动操作，在引入混合厌氧气体前，先用N₂气体置换两次。
2. 使用硫化氢去除柱（图1C）以实现无需维护的硫化氢清除。在培养箱内放置除湿器，以去除催化剂反应生成的H₂O，并避免产生促进污染扩散的气溶胶。
   注意：硫化氢是多种厌氧细菌的天然代谢副产物，其积累对细菌具有毒性，并可能导致电子设备损坏以及缩短催....

结果

图1. 厌氧乙烯基舱及其组件。（A）一个完全与大气氧隔离的乙烯基厌氧舱，可同时为两人提供操作空间（32 英寸 × 78 英寸）。舱内配有设定在 37 °C 的培养箱（后中部）。（B）气闸室用于将物品从实验室环境转移至厌氧舱内。图示为一个通过控制器操作的自动气闸室，可编程自动执行创建厌氧环境所需的抽真空和吹扫程序。（C）硫化氢去除柱可无需维护地高效去除有害的硫化氢。（D）两个催化剂风扇箱分布在厌氧舱内部，用于促进舱内气体通过钯催化剂循环，在氢气存在下除去氧气。厌氧舱的设置依照制造商的说明进行。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
乙烯厌氧培养箱-型号B	Coy Laboratory Products		Model 2000 培养箱
含5%绵羊血的TSA II胰蛋白酶大豆琼脂	BBL	221261
人脐静脉内皮细胞（10名供体混合样本）	LifeLine Technology	FC-0044
VascuLife VEGF完全培养基试剂盒	LifeLine Technology	LL-0003
TrypKit	LifeLine	LL-0013
皂苷	Riedel-de Haen	16109