宿主内皮细胞内化厌氧菌的可视化

摘要

来源:Wunsch， C. M. et al.， 牙龈卟啉单胞菌作为评估厌氧菌与宿主细胞相互作用的模式生物。 （2015 年）

在本视频中，我们演示了一种使用共聚焦显微镜在人内皮细胞内可视化内化牙龈卟啉单胞菌（一种厌氧病原菌）的程序。细菌用荧光染料染色，而宿主内皮细胞肌动蛋白细胞骨架用不同的荧光染料标记。使用共聚焦显微镜观察内皮细胞内内化的牙龈卟啉单胞菌。

方案

1. 细菌内化到宿主细胞中（荧光显微镜）

>注:P. gingivalis 用 2'，7'-Bis-（2-羧乙基）-5-（和-6）-羧基荧光素，乙酰氧基甲酯 （BCECF-AM） 标记。BCECF-AM 是一种非荧光膜渗透性染料;它通过细胞内酯酶的作用转化为荧光素 BCECF 可以指示细胞活力。P. gingivalis 用 BCECF-AM 染料标记，然后用于感染真核细胞。感染后，固定细胞并用 DAPI 和 TRITC-鬼笔环肽标记。用于染色真核细胞核的 DAPI 染色剂也将标记细菌细胞核，这为识别不能代谢裂解 BCECF-AM 的无活力细菌提供了一种对策。宿主细胞用 TRITC-鬼笔环肽（一种红色肌动蛋白染料）突出显示。

1. 高压灭菌器盖玻片。在以 5 x 10⁴ 个细胞/孔接种内皮细胞之前，无菌地将盖玻片添加到 12 孔板中。（实验前一天准备）
2. 如上所述，在 12 孔板中的 18 mm（#1.5 厚度）圆形盖玻片上制备内皮细胞。
3. 准备生长至对数中期的厌氧菌 （OD₆₆₀ = 0.5-0.7）。
4. 通过以 5,000 x g 离心并将沉淀以 5-7 x 10⁸ 个细胞/ml 的浓度悬浮在 PBS 中，用厌氧 PBS 洗涤细菌 2 ....

材料