一种评估肿瘤特异性抗体在体内定位的技术

摘要

来源：Shivange, G.，等。靶抗原特异性治疗性抗体在肿瘤和组织中的分布分析。J. Vis. Exp. (2020)。

本视频展示了一种在小鼠肿瘤异种移植模型中研究肿瘤特异性抗体体内定位的技术。将癌细胞皮下注射至小鼠体内以形成肿瘤后，注射可结合肿瘤特异性受体的荧光标记抗体，从而通过成像技术实现对抗体体内定位的评估。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 抗体的表达与纯化

1. 中国仓鼠卵巢（CHO）细胞的培养
   1. 在含商业化1倍谷氨酰胺补充剂的FreeStyle CHO培养基中，于37 ˚C、130 rpm振荡条件下，使用带挡板的Erlenmeyer烧瓶（玻璃或一次性）并在5% CO₂环境中培养CHO细胞。
      注意：强烈建议使用带挡板且带通气盖的烧瓶，以增强搅拌并改善振荡过程中的气体交换。使用普通烧瓶（无挡板）时，由于悬浮培养的搅拌受限，抗体产量显著降低。
   2. 维持细胞密度在1–5 × 10⁶ 个细胞/mL之间，细胞活力需保持在>95%。若细胞密度超过5 × 10⁶ 个细胞/mL，应进行传代。切勿使CHO细胞密度低于0.2 × 10⁶ 个细胞/mL。
2. CHO细胞的转染
   1. 在200 mL培养基（2 × 10⁶ 个细胞/mL）中，使用带挡板的Erlenmeyer烧瓶培养CHO细胞。
      注意：在带挡板烧瓶中培养的悬浮细胞，其蛋白产量始终高于在无挡板烧瓶中培养的细胞。....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
FreeStyle CHO 培养基	Gibco Life Technologies	Cat # 12651-014
Anti-Anti (100X)	Gibco Life Technologies	Cat # 15240-062
防结块剂	Gibco Life Technologies	Cat # 01-0057DG
BD 胰岛素注射器	BD BioSciences	Cat #329420
Caliper IVIS Spectrum	PerkinElmer	Cat #124262
CHO CD EfficientFeed B	Gibco Life Technologies	Cat #A10240-01
Corning 500 mL DMEM（Dulbecco 改良 Eagle 培养基）	Corning	Cat # 10-13-CV
Corning 500 mL RPMI 1640	Corning	Cat # 10-040-CV
Cy5 标记的抗人 IgG (H+L)	Jackson ImmunoResearch	Cat # 709-175-149
GlutaMax-I (100X)	Gibco Life Technologies	Cat # 35050-061
HiPure 质粒大提试剂盒	Invitrogen	Cat # K21007
HiTrap MabSelect SuRe 柱	GE Healthcare	Cat # 11-0034-93
Infusion	Takara BioScience	STO344
IRDye 800CW NHS 酯	LI-COR	Cat # 929-70020
异氟烷，USP	Covetrus	Cat # 11695-6777-2
润滑性眼膏	Refresh Lacri-Lube	Cat #4089
Matrigel	Corning	Cat # 354234
PEI 转染试剂	Thermo Fisher	Cat # BMS1003A
Slide-A-Lyzer 透析夹	Thermo Scientific	Cat # 66333
Steritop 真空滤器	Millipore Express	Cat #S2GPT02RE
胰蛋白酶-EDTA	Gibco Life Technologies	Cat # 15400-054
实验模型：细胞系
人：OVCAR-3	美国模式培养物集存库	ATCC HTB-161
人：CHO-K 细胞	本实验室稳定转染获得	ATCC CCL-61
小鼠：4T1	由 UVA 的 Chip Landen 博士惠赠
小鼠：MC38	由 UMBC 的 Suzanne Ostrand-Rosenberg 博士惠赠	通过 STR 分型验证
小鼠：MC38 hFOLR1	本实验室构建（本文）
实验模型：动物
小鼠：裸鼠 Foxn1nu/Foxn1+	Envigo	多次订购
小鼠：NOD.Cg Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ	Jackson Laboratory	多次订购