结核分枝杆菌感染巨噬细胞亚群的流式细胞术染色

摘要

来源：Mily, A., 等 人源单核细胞来源M1与M2型极化及流式细胞术分析 结核分枝杆菌 感染。 视频实验杂志 (2020)

本视频展示了一种利用多色荧光抗体组合的流式细胞术设门策略，用于分析细胞活力及特定的荧光标记抗人抗体标志物。该方法能够准确测定结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）感染细胞群体的百分比。

方案

1. 结核分枝杆菌感染的单核细胞来源细胞的流式细胞术染色

注意：以下步骤必须在生物安全三级（BSL-3）设施中进行。流式细胞术染色可在96孔板中进行，而非离心管中。

1. 在 37 °C 和 5% CO₂ 条件下，通过向 6 孔板的每孔中加入 1 mL FACS 缓冲液孵育至少 30 分钟，使结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）感染的细胞（以及未感染的对照组细胞）从孔壁上脱落。
2. 轻轻吹打数次以确保细胞完全脱落。如有可能，通过显微镜观察确认细胞是否已完全脱落。将每孔中的细胞悬液转移至带螺旋盖的微量离心管中，在 200 x g 下离心 5 分钟。小心用移液器吸弃上清液。
3. 用 FACS 缓冲液将每管中的细胞沉淀洗涤两次，每次在 200 x g 下离心 5 分钟。
4. 将细胞（约 0.5 × 10⁶ 至 1 × 10⁶ 个细胞/管）与约 50 µL 荧光染料标记的抗人抗体混合液（包括 TLR2 (AF647)、CD206 (APC-Cy7)、CD163 (BV605)、CD80 (BV650)、CCR7 (BV711)、CD86 (BV786)、CD200R (PE)、CD64 (PE-Dazz....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
甲醛	Sigma-Aldrich	F8775
山羊抗小鼠IgG Alexa Fluor 594二抗	Invitrogen	R37121	CD64二抗
山羊抗兔IgG Alexa Fluor 594二抗		A-11037	CD163二抗
胎牛血清（FBS）	Sigma-Aldrich	F7524
EDTA（0.5 M）	Karolinska University hospital, Huddinge	N/A
BD Comp bead plus	BD	560497