人肠上皮类器官模型中坏死性小肠结肠炎的诱导

摘要

来源：Ares, G. J.，等。一种新型的人类上皮类肠器官坏死性小肠结肠炎模型。J. Vis. Exp.(2019)。

本视频展示了在人源性新生儿肠类器官模型中，通过脂多糖处理诱导坏死性小肠结肠炎疾病的发生过程。该模型有助于研究肠道病理生理学。

方案

所有涉及人类参与者的操作均按照机构、国家和国际的人类福利指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 试剂准备

1. 准备用于完整组织采集的培养基储备液：1 L 达尔伯克改良伊格尔培养基（DMEM）、110 mL 胎牛血清（FBS）、11 mL 青霉素-链霉素（终浓度 1%）和 1.1 mL 过滤除菌的胰岛素（终浓度 0.1%）。将储备液储存于 4 °C。
2. 准备螯合缓冲液 #1：30 mL 培养基（如步骤 1.1 所述）、600 µL 0.5 M 乙二胺四乙酸（EDTA）（终浓度 10 mM）、300 µL 庆大霉素（终浓度 1%）和 60 µL 两性霉素 B（终浓度 0.2%）。将储备液储存于 4 °C。
3. 准备螯合缓冲液 #2：30 mL 培养基（如步骤 1.1 所述）、300 µL 0.5 M EDTA（终浓度 5 mM）、300 µL 庆大霉素（终浓度 1%）和 60 µL 两性霉素 B（终浓度 0.2%）。将储备液储存于 4 °C。
4. 准备人源类肠道培养基：41.4 mL DMEM/F-12、5 mL FBS（终浓度 10%）、500 µL 青霉素-链霉素（终浓度 1%）、500 µL L-谷氨酰胺（终浓度 1%）、500 µL 庆大霉素（终浓度 1%）、100 µL 两性霉素 B（终浓度 0.2%）、500 µL 1 M N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
4% 多聚甲醛	ThermoFisher	AAJ19943K2
基底膜基质（Matrigel）	Corning	CB-40230C
DMEM/F-12	ThermoFisher	MT-16-405-CV
杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM）	ThermoFisher	11-965-118
杜尔贝科磷酸盐缓冲液（DPBS）	ThermoFisher	14190-144
表皮生长因子（EGF）	Sigma	E9644-.2MG
乙二胺四乙酸（EDTA）	Sigma	EDS-500G
胎牛血清（FBS）	Gemini Bio-Pro	100-125
磷酸盐缓冲液（PBS）	Sigma	P5368-5X10PAK
RPMI 1640 培养基	Invitrogen	11875093
组织处理胶（Histogel）	ThermoFisher	22-110-678
脂多糖（LPS）	Sigma	L2630-25MG
庆大霉素	Sigma	G5013-1G