在人上皮小肠样模型中诱导坏死性小肠结肠炎

Abstract

来源:Ares， G. J. et al. 坏死性小肠结肠炎的新型人上皮肠样模型。J. Vis. Exp.（2019 年）。

该视频演示了脂多糖治疗诱导的人源性新生儿肠样模型中坏死性小肠结肠炎疾病的发展。该模型有助于研究肠道病理生理学。

Protocol

所有涉及人类参与者的程序均已按照机构、国家和国际人类福利指南执行，并已由当地机构审查委员会审查。

1. 试剂制备

1. 准备用于整个组织收集的培养基储备溶液:1 L Dulbecco 改良 Eagle 培养基 （DMEM）、110 mL 胎牛血清 （FBS）、11 mL 青霉素-链霉素（终浓度 1%）和 1.1 mL 过滤灭菌胰岛素（终浓度 0.1%）。将储备溶液储存在4°C。
2. 准备螯合缓冲液 #1:30 mL 培养基（如 1.1 中所述）、600 μL 0.5 M 乙二胺四乙酸 （EDTA）（终浓度 10 mM）、300 μL 庆大霉素（终浓度 1%）和 60 μL 两性霉素 B（终浓度 0.2%）。将储备溶液储存在4°C。
3. 准备螯合缓冲液 #2:30 mL 培养基（如 1.1 中所述）、300 μL 0.5 M EDTA（终浓度 5mM）、300 μL 庆大霉素（终浓度 1%）和 60 μL 两性霉素 B（终浓度 0.2%）。将储备溶液储存在4°C。
4. 制备人小肠培养基:41.4 mL DMEM/F-12、5 mL FBS（最终 10%）、500 μL 青霉素-链霉素（最终浓度 1%）、500 μL L-谷氨酰胺（最终浓度 1%）、500 μL 庆大霉素（最终浓度 1%）、100 μL 两性霉素 B（最终浓度 0.2%）、500 μL 1 M N-2-羟乙基哌嗪-....

Materials