用于评估小鼠模型中葡萄膜炎的光学相干断层扫描成像

摘要

来源：John, S. 等，Primed Mycobacterial Uveitis (PMU) as a Model for Post-Infectious Uveitis. 用于研究感染后葡萄膜炎的致敏分枝杆菌性葡萄膜炎（PMU）模型。 J. Vis. Exp. (2021)

本视频展示了一种用于检测和量化感染后葡萄膜炎小鼠模型中眼部炎症的体内成像技术。该技术称为光学相干断层扫描（OCT），可生成眼部的高分辨率横断面图像，用于评估疾病进展。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 皮下注射用抗原的制备

1. 在化学通风橱内进行本节中的所有操作，以避免吸入或皮肤接触结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）H37Ra 干粉。根据您所在机构对完全弗氏佐剂（通常为生物安全等级1，BSL-1）的管理规定进行操作，包括使用耐化学腐蚀的手套、安全护目镜和防护工作服（实验外套）。
2. 采用良好的无菌技术，防止引入实验动物体内的试剂受到污染。
3. 在5 mL 微量离心管中，将5 mg 冻干、热灭活的结核分枝杆菌（M. tuberculosis）H37Ra 干粉与2.5 mL 冷的磷酸盐缓冲液（PBS）混合，制备Mtb 悬液。涡旋振荡30秒后置于冰上。
4. 为在PBS中形成H37Ra的细小悬液，将悬液置于冰上超声处理5分钟。
   1. 松开转换器单元的主体，用70%（v/v）乙醇棉片清洁探头。
   2. 开启超声仪，通过旋转功率控制旋钮将功率调节至4档，将探头尖端浸入含有分枝杆菌干粉的PBS中。确保探头尖端至少浸入样品深度的一半，且探头尖端不接触微量离心管管壁。
5. 在冰上对混合物超声30秒，暂停30秒，重复操作，总时长为5分钟，以充分....

结果

图1：小鼠玻璃体内注射装置示意图。 玻璃体内注射在小鼠眼部进行，使用（A）连接至（B）微型泵的微量注射泵控制器，以及（C）注射用微量注射器。注射器装载后安装于（D）微型泵上。通过（E）耳杆固定小鼠头部，以确保玻璃体内注射过程中位置稳定且操作一致。（F）注射液中的荧光素在成功注射后可在眼内产生绿色反光。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
AK-FLUOR	美国伊利诺伊州阿科恩制药公司		5 mL 小瓶装 10% 荧光素钠（100 mg/mL）
AnaSed	美国伊利诺伊州阿科尔恩动物健康公司	NDC 59399-110-20	赛拉嗪 20 mg/mL
5% 碘伏无菌眼科清洗液	美国德克萨斯州阿尔康	8007-1
B-D 精密滑针 -25 G	Becton, Dickinson and Company，新泽西州，美国	305122
B-D Precision Glide 针头 -30-G	Becton, Dickinson and Company，新泽西州，美国	305106
Bond MAX，Bond Rx	Leica Biosystems，伊利诺伊州，美国		全自动IHC染色系统
氯霉素软膏	英国罗姆福德，马丁代尔制药公司		1% w/w 氯霉素
EG1150H	Leica Biosystems，伊利诺伊州，美国		组织包埋
Envisu R2300	Bioptigen/Leica		OCT 机器
弗氏不完全佐剂	BD Difco，新泽西州，美国	263910
GenTeal 润滑眼膏	美国德克萨斯州阿尔康	---
GenTeal 润滑眼用凝胶	美国德克萨斯州阿尔康	---
H37Ra 冻干分枝杆菌提取物	BD Difco，新泽西州，美国	231141
Hamilton RN 针头 (33/12/2)S	Hamilton，美国内华达州雷诺	7803-05(33/12/2)	33 G
汉密尔顿注射器	Hamilton，美国内华达州里诺市	CAL7633-01	5 µL
胰岛素注射针头	Exel International，美国	26029	1 mL
异氟烷
Ketaset	硕腾，美国	377341	氯胺酮盐酸盐 100 mg/mL
显微注射器泵和Micro4Controller	美国佛罗里达州，世界精密仪器公司	UMP3
Micron IV	Phoenix Research Laboratories，普莱森顿，加利福尼亚州		替代成像/OCT设备
Nanofil 10 µL 注射器	美国佛罗里达州世界精密仪器公司	NANOFIL
Nanofil 眼内注射套件	美国佛罗里达州，世界精密仪器公司	IO-KIT
Olympus SZX10	Olympus		解剖显微镜
PBS	Gibco	14190
盐酸去氧肾上腺素滴眼液 USP 2.5%，无菌，15 mL	美国伊利诺伊州阿科恩制药公司	17478020115
RM2255	Leica Biosystems，伊利诺伊州，美国		组织切片
结核病注射器	Becton, Dickinson and Company，新泽西州，美国	309602	1 mL
0.5%丁卡因	美国德克萨斯州阿尔康	1041544
Tissue Tek VIP 系列	Sakura Finetek USA, Inc., CA		组织学组织处理
1% 托吡卡胺	英国罗姆福德乔文制药公司		最小量
泰诺	Johnson & Johnson Consumer Inc, PA, 美国	NDC 50580-614-01	对乙酰氨基酚
维适泰	诺华制药，英国坎伯利		0.2% w/w 卡波姆眼用凝胶