一种用于外周血采集和血浆分离的小鼠尾尖剪取操作方法

摘要

来源：Coats, J. S. 等，通过细胞因子转导的基质细胞系注射在患者来源的异种移植模型中表达外源性细胞因子。J. Vis. Exp. (2017)

在本视频中，我们演示了在小鼠模型中通过断尾法采集外周血的操作步骤。采集的血液随后经过离心处理以分离血浆，所得血浆可用于后续实验。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 动物医学评审委员会的审核。

1. 小鼠外源性人细胞因子的系列血液采集与血浆监测

1. 血液采集 通过 尾部组织取样
   1. 对生物安全柜进行消毒，并组装小鼠固定器、剪刀及其他手术所需器械/用品。
   2. 将小鼠放入固定器中，并固定管子以尽量减少小鼠移动。
   3. 用异丙醇对尾部和手术剪进行消毒。在尾部涂抹局部麻醉药膏。
   4. 使用非常锋利的手术剪剪下小鼠尾尖约0.5–1 mm。用肝素化毛细管收集约80 µL外周血。
      注意： 若采用此方法采血超过六次，断尾时应保守控制断尾长度。随着断尾位置向尾部近端上移，尾部直径增大，出血速度加快，愈合时间也更长。

2. 血浆分离

1. 使用洗耳球将血液从毛细管中排出，转移至已标记的含K₂EDTA的微量采血管中；轻轻倒置混匀20次，以防止凝血。
   注意：通常情况下，尾部取血后的凝血速度较快。然而，若出血持续超过约2分钟，可使用止血笔或止血粉促进凝血。
2. 根据制造商说明书离心血液采集管，分装血浆并储存于-20 °C，待后续分析时使用。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
带套管的动物可植入纳米应答器	Trovan	ID-100B(1.25)
EMLA 利多卡因麻醉乳膏（通过动物护理机构凭处方获取）	处方	处方
BD ½ cc LO-DOSE U-100 胰岛素注射器 28G½	BD	#329461
含 K2EDTA 的 BD Microtainer 采血管	BD	#365974
离心机	Beckman Coulter	Alegra X-15R
FisherBrand 毛细管（肝素化）	Fisher Scientific	22-260-950
血细胞计数板	Fisher	02-671-6
MACSQuant Analyzer 10	Miltenyi Biotec	130-096-343
小鼠 Pie 笼	Braintree Scientific, Inc.	MPC-1
小鼠尾部照明固定器	Braintree Scientific, Inc.	MTI STD
手枪式植入器	Trovan	IM-300(1.25)
"NSG 小鼠" NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ，雄性或雌性，6–8 周龄	JAX Mice	# 005557