用于表征淋巴细胞亚型的三维定量相位成像

Abstract

来源:Yoon， J. et al. 使用三维定量相位成像和机器学习对淋巴细胞亚型进行无标记鉴定。J. Vis. Exp.（2018 年）

该视频演示了通过 3D 定量相位成像对淋巴细胞形态和生化进行无标记鉴定。该技术允许对淋巴细胞进行全面分析，揭示其内部结构和特性，而无需标记程序。

Protocol

1. 流式细胞术和淋巴细胞亚型分选

注意:根据细胞类型对淋巴细胞进行排序对于建立真实（即正确）细胞类型标签以在监督学习中训练和测试细胞类型分类器至关重要。流式细胞术是一种金标准方法，用于识别和分离淋巴细胞。

1. 在 100 μL 新鲜 RPMI-1640 培养基中制备表面标志物染色抗体的混合物 [含 10% FBS、0.1 μg CD3e （17A2）、CD8a （53-6.7）、CD19 （1D3）、CD45R（B220、RA3-6B2）和 NK1.1 （PK136）] 和 0.25 μg CD4 （GK1.5） 针对靶标 B、CD4⁺ T 和 CD8⁺ T 淋巴细胞的抗体。
2. 向细胞悬液中加入 100 μL 抗体混合物。
3. 在冰上孵育 25 分钟。
4. 加入 5 mL PBS 并在 4 °C 下以 400 x g 离心 5 分钟，洗涤细胞两次。
5. 将细胞沉淀重悬于 5 mL 新鲜的 RPMI-1640 培养基中，含 10% FBS 和 2.5 μg DAPI（4'，6-二脒基-2-苯基吲哚）。
6. 使用上述标记物的荧光水平，用流式细胞术分别收集每种淋巴细胞类型。同时使用 DAPI 信号排除死细胞。

Materials