来源：Neuhaus, V. 等., 利用人源精密切割肺组织片评估物质的细胞毒性和免疫调节作用. J. Vis. Exp. (2018)
在本视频中，我们描述了一种使用琼脂糖灌注离体人肺并制备人源精密切割肺片的方法。所制备的 离体 肺组织切片可用于进一步的免疫学实验。
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方法文章
基于琼脂糖的人类精密切割肺组织片制备
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2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。
1. 人肺组织切片的常规制备及后续化学物质暴露
注意：填充肺脏需要两人协作完成。建议操作人员具备最新的甲型和乙型肝炎疫苗接种记录。患者在肺移植前通常会常规筛查丙型肝炎病毒（HCV）和人类免疫缺陷病毒（HIV）。若诊断或怀疑存在结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）的活动性感染，则应弃用该肺脏。然而，所有新鲜的人肺组织及其衍生样本均应视为具有潜在传染性，并须采取相应的防护措施（如颗粒物过滤口罩（FFP2）、防护眼镜、手套），以确保工作人员的职业安全。该操作过程耗时60至90分钟。
- 确认人肺叶的完整性。
注意：胸膜若有撕裂，会导致组织充填不均。本实验所用的人肺组织须为手术切除当日获取。在用冰上的琼脂糖进行充填前，组织可在室温（RT）下保存约2小时，此期间可耐受。本方案中使用的组织来源于接受肺叶切除术的患者，而非来自已故捐献者。若组织曾置于冰上保存，充填前需先恢复至室温，否则琼脂糖会立即聚合，无法实现均匀充填。
注意：所有接触未经处理人源组织的人员必须穿戴防护服，包括实验服、两副手套、帽子、口罩和护目镜。人源组织可能具有潜在感染性。 ....
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 硅胶管 3.0 x 5.0 mm | A. Hartenstein (Leipzig, Germany) | SS04 | |
| 注射器 | Faust Lab Science (Klettgau, Germany) | 9.410 050 | |
| 取芯工具 | 定制 | Custom-made | |
| 修整刀片手柄（FEATHER） | pfm medical ag (Cologne, Germany) | 205530001 | |
| 修整刀片（FEATHER） | pfm medical ag (Cologne, Germany) | 205500000 | |
| 切片机：组织切片器 | Alabama R&D (Bad Homburg, Germany) | 303400-ADPT | Krumdieck 组织切片器 (MD6000) |
| 切片机刀片 | Wilkinson Sword (Solingen, Germany) | ENR-4027800011506 | |
| 组织培养皿 | Sigma (München, Germany) | Z666246-420EA | |
| 接种环 | Copan Diagnostics (Murrieta, USA) | CD176S01 | |
| TPP 24孔组织培养板 | Sigma (München, Germany) | Z707791-126EA | |
| 包埋盒 | Thermo Scientific (Schwerte, Germany) | 1000957 | |
| Nunc MaxiSorp 平底板 | Fisher Scientific GmbH (Hannover, Germany) | 44-2404-21 | |
| Nunc MicroWell 96孔板 | Thermo Scientific (Schwerte, Germany) | 260836 | |
| 试剂 | |||
| 低凝胶温度琼脂糖 | Sigma (München, Germany) | A9414-100G | |
| 平衡盐混合物与溶液，细胞培养，经典培养基与盐类，Earle's 平衡盐溶液（EBSS） | Sigma (München, Germany) | E2888-500ML | |
| 青霉素和链霉素 | Lonza (Verviers, Belgium) | 17-602E | |
| Dulbecco 改良 Eagle 培养基 F-12 Ham 营养混合物（DMEM F-12） | Gibco (Darmstadt, Germany) | 11039-047 | 培养基 |
| 含钙镁的 Dulbecco 磷酸盐缓冲液（DPBS） | Lonza (Verviers, Belgium) | BE17-513F |
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