来源：Neuhaus, V. 等，利用人源精密切割肺组织切片评估物质的细胞毒性和免疫调节作用 J. Vis. Exp. (2018)
本视频展示了一种通过WST-1法评估人源性精准切割肺组织切片细胞毒性的技术。将人源性精准切割肺组织切片暴露于梯度浓度的细胞毒性化学物质中，以定量其细胞毒性效应。颜色强度的降低可作为该化学物质对肺细胞产生有害影响的证据。
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方法文章
一种用于检测化学诱导人肺组织精准切片细胞毒性的实验方法
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2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。
1. 人源精密切割肺组织片（PCLS）的常规制备及后续化学物质暴露
注意：填充一个肺需要两个人。建议具备最新的甲型和乙型肝炎疫苗接种记录。在肺移植前，患者通常会进行丙型肝炎病毒（HCV）和人类免疫缺陷病毒（HIV）的常规筛查。如果诊断或怀疑存在 Mycobacterium tuberculosis 的活动性感染，则应弃用该肺。然而，所有新鲜的人肺组织及其衍生样本均必须视为具有潜在传染性，并须采取相应的防护措施（颗粒过滤口罩（FFP2）、护目镜、手套），以确保工作人员的职业安全。该操作耗时60至90分钟。
- 确认人肺叶的完整性。
注意： 胸膜撕裂会阻碍组织的均匀灌注。人肺组织必须取自手术切除当天。在冰上用琼脂糖灌注前，室温下保存约2小时是可接受的。本方案所用组织来源于接受肺切除术的患者，而非来自已故捐献者。若组织曾置于冰上保存，灌注前需先升温至室温，否则琼脂糖会立即聚合，无法实现均匀灌注。
注意： 确保所有接触人体原代材料的人员穿戴防护服，包括实验服、两副手套、帽子、口罩和一副护目镜。人体材料可能具有感染性。 - 称取7.5....
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 硅胶管 3.0 × 5.0 mm | A. Hartenstein (Leipzig, Germany) | SS04 | |
| 注射器 | Faust Lab Science (Klettgau, Germany) | 9.410 050 | |
| 取芯工具 | 定制 | 定制 | |
| 修整刀片手柄（FEATHER） | pfm medical ag (Cologne, Germany) | 205530001 | |
| 修整刀片（FEATHER） | pfm medical ag (Cologne, Germany) | 205500000 | |
| 切片机：组织切片器 | Alabama R&D (Bad Homburg, Germany) | 303400-ADPT | Krumdieck 组织切片器 (MD6000) |
| 切片机刀片 | Wilkinson Sword (Solingen, Germany) | ENR-4027800011506 | |
| 细胞筛滤器（100 µm 尼龙） | Becton Dickinson (Heidelberg, Germany) | BD352360 | |
| 接种环 | Copan Diagnostics (Murrieta, USA) | CD176S01 | |
| TPP 组织培养板，24 孔 | Sigma (München, Germany) | Z707791-126EA | |
| Nunc MaxiSorp 平底板 | Fisher Scientific GmbH (Hannover, Germany) | 44-2404-21 | |
| Nunc MicroWell 96 孔板 | Thermo Scientific (Schwerte, Germany) | 260836 | |
| 多功能酶标仪 | Tecan Group Ltd. (Männedorf, Switzerland) | Tecan infinite F200Pro | 酶标仪 |
| 微孔板振荡器 | Edmund Buehler GmbH (Hechingen, Germany) | KM-2 Akku | |
| 检测试剂盒 | |||
| 细胞增殖检测试剂 WST-1 | Roche (Basel, Switzerland) | 11644807001 | |
| 试剂 | |||
| 低凝胶温度琼脂糖 | Sigma (München, Germany) | A9414-100G | |
| 平衡盐混合物与溶液，细胞培养，经典培养基与盐类，Earle's 平衡盐溶液（EBSS） | Sigma (München, Germany) | E2888-500ML | |
| 青霉素和链霉素 | Lonza (Verviers, Belgium) | 17-602E | |
| Dulbecco 改良 Eagle 培养基营养混合物 F-12 Ham（DMEM F-12） | Gibco (Darmstadt, Germany) | 11039-047 | 培养基 |
| 含钙镁的 Dulbecco 磷酸盐缓冲液（DPBS） | Lonza (Verviers, Belgium) | BE17-513F | 缓冲液 |
| 去垢剂 | Sigma (Saint Louis, USA) | X100-100ML | Triton X-100 |
