通过乳酸脱氢酶检测法评估肺组织切片中的细胞毒性和膜完整性

摘要

来源：Neuhaus, V., 等. 在人源精准切割肺组织切片中评估物质的细胞毒性和免疫调节作用. J. Vis. Exp. (2018).

本视频演示了乳酸脱氢酶（LDH）检测法，用于测定待测物质对人肺组织精准切片的细胞毒性作用及其对细胞膜完整性的影​​响。该检测可对样本中的细胞死亡或损伤程度提供定量评估。

方案

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行

1. 人肺组织切片的常规制备及后续化学物质暴露

注意：填充肺脏需要两人协作完成。建议操作人员具备最新的甲型和乙型肝炎疫苗接种记录。在肺移植前，患者通常会常规筛查丙型肝炎病毒（HCV）和人类免疫缺陷病毒（HIV）。若诊断或怀疑存在Mycobacterium tuberculosis的活动性感染，则应弃用该肺脏。然而，所有新鲜的人肺组织及其衍生样本均应视为具有潜在传染性，并必须采取相应的防护措施（如颗粒过滤口罩（FFP2）、防护眼镜、手套），以确保工作人员的职业安全。该操作过程耗时60至90分钟。

1. 确认人肺叶的完整性。
   注意： 胸膜撕裂会阻碍组织的均匀灌注。人肺组织必须取自手术切除当天。在冰上用琼脂糖灌注前，组织在室温下保存约2小时是可接受的。本方案所用的组织来自接受肺切除术的患者，而非来自已故患者。若组织曾置于冰上保存，灌注前需先将其预热至室温，否则琼脂糖会立即聚合，无法实现均匀灌注。
   注意： 确保所有接触人体原代材料的人员穿戴防护服，包括实验服、两副手套、帽子、口罩和一副护目镜。人体材料可能具有感染性。
2. 称取7.5....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Nunc MicroWell 96孔板	Thermo Scientific (Schwerte, Germany)	260836
图像渲染软件	Bitplane AG (Zürich, Switzerland)	IMARIS 7.6
LSM图像浏览器	Zeiss (Jena, Germany)
多孔板读板仪	Tecan Group Ltd. (Männedorf, Switzerland)	Tecan infinite F200Pro	酶标仪
细胞毒性检测试剂盒（LDH法）	Roche (Basel, Switzerland)	11644793001
细胞增殖检测试剂 WST-1	Roche (Basel, Switzerland)	11644807001
洗涤缓冲液	Merck (Darmstadt Germany)	524653	PBS中含0.05% Tween 20
去垢剂	Sigma (Saint Louis, USA)	X100-100ML	Triton X-100