使用工程淋巴细胞筛选免疫调节化合物的基于荧光的测定

Abstract

来源:Fouda， A. 等人，适用于小分子高通量筛选的基于荧光的淋巴细胞测定。J. Vis. Exp.，（2017 年）。

该视频演示了通过基于荧光的分析筛选免疫调节化合物。用这些化合物处理具有绿色荧光蛋白表达盒的转基因小鼠来源的 T 淋巴细胞。增强和减少的 GFP 信号能够分别识别化合物的刺激和抑制作用。

Protocol

1. 脾细胞培养基和流式细胞术缓冲液的制备

1. 在 70% 乙醇清洁的生物罩下执行所有步骤。
2. 取出 70 mL 预热的 Roswell Park Memorial Institute （RPMI） 1640 1x 培养基（市售，以过滤的 500 ml 体积无菌瓶提供）并放入无菌管中。去除的培养基将在实验步骤的后面使用。
在
3. 剩余的 430 mL RPMI 1640 1x 中补充 50 ml 灭活胎牛血清 （FBS）、5 mL 青霉素/链霉素、5 mL N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸 （HEPES）、5 mL 非必需氨基酸、5 mL 丙酮酸钠和 0.05 mL 过滤 （1M） 2-巯基乙醇><。 注意:使用设置为 37 ºC 的水浴预热脾细胞培养基，以避免热休克细胞。这对于避免诱导细胞凋亡很重要。
4. 要制备流式细胞术缓冲液，请将 2 mL FBS 添加到 98 ml 磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 中，并冷藏直至使用（最好在三天内）。

2. Nur77^GFP 小鼠脾脏生成脾细胞悬液

1. 无菌分离 6-8 周龄雌性 Nur77^GFP 小鼠的脾脏。
   1. 为此，请在无菌罩下工作。将牺牲的小鼠皮毛、剪刀和镊子浸....

Materials