一种基于多重微球的检测方法用于分析人泪液样本中的细胞因子

摘要

来源：Balne, P. K., 等. 基于微球的多重检测法分析泪液细胞因子谱. J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了一种基于微球的多重检测方法，用于分析人泪液中的细胞因子。该方法能够对单一样本中的多种细胞因子进行同时检测，显著提高了灵敏度，有助于研究各种病理生理条件下免疫反应的变化。

方案

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。

1. 泪液细胞因子分析

1. 泪液采集：
   1. 让受试者舒适地坐在检查椅上，并将头部靠在头托上。
   2. 让受试者向上看，小心打开Schirmer试纸条（由Whatman 41号滤纸制成），将试纸条的圆端置于眼睑下穹窿处，指导受试者闭眼5分钟。在采集泪液时，应尽量减少对眼表的接触。
   3. 让受试者睁开眼睛，取出试纸条并放入无菌的1.5 mL微量离心管中。立即将离心管转移至实验室，或在检测细胞因子谱型前于-80 ^oC保存。
2. 从泪液滤纸条中洗脱泪液样本：
   1. 将泪液滤纸条剪成0.5 cm长度（以标准化待测泪液量），并放入无菌的1.5 mL微量离心管中。
   2. 加入30 µL检测缓冲液，在室温下孵育5分钟，随后以14,000 × g离心1分钟。
   3. 将上清液转移至另一支1.5 mL微量离心管中，弃去滤纸条。将含样本的离心管置于冰上，并立即用于细胞因子谱型分析。
3. 试剂准备：
   ​注意：每个样本通过基于微球的....

结果

图1：泪液细胞因子谱分析的示意图流程图。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Milliplex MAP 人细胞因子/趋化因子磁珠面板-1 试剂盒	默克，美国	HCYTOMAG-60K-41
Flexmap 3D Luminex 仪器	Luminex Corp，美国德克萨斯州奥斯汀
xPonent 软件	Luminex Corp，美国德克萨斯州奥斯汀
RBXGenerator 软件	伯乐，法国
Bio-Plex Manager 6.1	BIO-RAD，法国
平板振荡器	美国康宁公司
TECAN 微孔板洗板机	Tecan，瑞士	HydroSpeed
移液器	Mettler Toledo，加利福尼亚州，美国
1.5 ml 微量离心管	Axygen，美国	MCT-150-C
Schirmer 泪液分泌试验试纸条	眼部护理与治疗，美国	101657
Flexmap 3D 校准试剂盒	Luminex Corp，美国德克萨斯州奥斯汀	40-028
Flexmap 3D 验证试剂盒	Luminex Corp，美国德克萨斯州奥斯汀	40-029
眼科检查椅