来源:Brien, J. D. 等,小鼠多种器官中寨卡病毒的分离与定量。J. Vis. Exp. (2019)
视频演示了在多种小鼠器官中定量寨卡病毒的实验方法 通过 空斑形成实验。该过程包括用病毒感染的组织匀浆感染哺乳动物细胞单层,随后使用甲基纤维素以阻止病毒扩散。接着采用免疫染色方法,实现对器官特异性感染能力的精确定量与测定。
需要JoVE订阅才能观看此内容。 请登录或开始免费试用
方法文章
1.8K 次观看
⸱
2025年7月8日
来源:Brien, J. D. 等,小鼠多种器官中寨卡病毒的分离与定量。J. Vis. Exp. (2019)
视频演示了在多种小鼠器官中定量寨卡病毒的实验方法 通过 空斑形成实验。该过程包括用病毒感染的组织匀浆感染哺乳动物细胞单层,随后使用甲基纤维素以阻止病毒扩散。接着采用免疫染色方法,实现对器官特异性感染能力的精确定量与测定。
所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。
1. 器官分离
注意: 病毒在室温(RT)下不稳定,因此必须合理规划单次采集的动物数量,以保持病毒滴度。
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 1-溴-3-氯丙烷(BCP) | MRC gene | BP151 | |
| 10 cc 注射器 | Thermo Fisher Scientific | BD 309642 | |
| 18G 针头 | Thermo Fisher Scientific | 22-557-145 | |
| 1 cc 结核注射器 | Thermo Fisher Scientific | 14-823-16H | |
| 20 cc 注射器 | Thermo Fisher Scientific | 05-561-66 | |
| 24 孔珠磨机 | Thermo Fisher Scientific | 15 340 163 | |
| 3.2 mm 不锈钢珠 | Thermo Fisher Scientific | NC9084634 | |
| 37°C 组织培养孵育箱 | Nuair | 5800 | |
| 4G2 抗体 | in house | ||
| 96 孔平底板 | Midsci | TP92696 | |
| 96 孔圆底板 | Midsci | TP92697 | |
| Basix 1.5 ml 离心管 | Thermo Fisher Scientific | 02-682-002 | |
| 浓缩杀菌漂白剂 | Staples | 30966CT | |
| CTL S6 分析仪 | CTL | CTL S6 Universal Analyzer | |
| 弯头剪刀 | Fine Science Tools | 14061-11 | |
| 杜尔贝科改良伊格尔培养基(高糖,含 4500 mg/L 葡萄糖) | MilliporeSigma | D5671 | |
| 乙醇(分子生物学级) | MilliporeSigma | e7023 | |
| 胎牛血清 | MilliporeSigma | F0926-500ML | |
| 镊子 | Fine Science Tools | 11036-20 | |
| 冰醋酸 | MilliporeSigma | 537020 | |
| 辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠抗体 | MilliporeSigma | 8924 | |
| HEPES 1 M | MilliporeSigma | H3537-100ML | |
| 异丙醇(分子生物学级) | MilliporeSigma | I9516 | |
| 氯胺酮/赛拉嗪混合液 | Comparative Medicine | ||
| L-谷氨酰胺 | MilliporeSigma | g7513 | |
| Magmax RNA 纯化试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | AM1830 | |
| 甲基纤维素 | MilliporeSigma | M0512 | |
| 微量离心机 | Ependorf | 5424R | |
| MiniCollect 0.5 ml EDTA 管 | Bio-one | 450480 | |
| O 型圈管 | Thermo Fisher Scientific | 21-403-195 | |
| 一步法 qRT-PCR 混合液 | Thermo Fisher Scientific | 4392938 | |
| 多聚甲醛 | Thermo Fisher Scientific | EMS- 15713-S | |
| 磷酸盐缓冲液 | MilliporeSigma | d8537-500ml | |
| Proline 多通道移液器 | Sartorius | 72230/72240 | |
| Proline 单通道移液器 | Sartorius | 728230 | |
| 无 RNA 酶水 | Thermo Fisher Scientific | 10-977-023 | |
| RNAzol BD | MRC gene | RB192 | |
| 摇床平台 | Thermo Fisher Scientific | 11-676-333 | |
| RPMI 1640 | Fisher | MT10040CV | |
| 皂苷 | MilliporeSigma | s7900 | |
| 药匙/刮勺 | Fine Science Tools | 10090-17 | |
| 直头剪刀 | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| 吐温 X-100 | MilliporeSigma | t8787 | |
| True Blue 底物 | VWR | 95059-168 | |
| 胰蛋白酶 | MilliporeSigma | T3924-100ML |