评估产细菌素小鼠粪便菌株的抗菌潜力

摘要

本视频展示了从小鼠粪便中分离的产细菌素乳酸菌的检测方法。该实验用于测定细菌素对特定细菌菌株的抗菌活性。

1. 乳酸菌计数与细菌素活性

取各样品的一个粪便颗粒，称重后置于1.5 mL离心管中，加入适量冰上预冷的0.9% NaCl溶液，配制成10%（w/v）的悬液。使用适用于1.5 mL离心管的无菌微型研磨杵充分匀浆粪便悬液，并用冰上预冷的0.9% NaCl溶液进行10倍系列稀释。
计数乳酸菌（LAB）总菌数。
1. 取稀释后的菌液（100 µL）加入4 mL预热的Man Rogosa Sharpe（MRS）软琼脂（50 °C，0.8%琼脂）中，涡旋混匀，然后将菌液倾注至固体MRS琼脂平板（1.5%琼脂）上。
2. 在超净工作台中打开皿盖，干燥5–10分钟，随后于30 °C培养20–24小时，以促进菌体生长和菌落形成。
计数产细菌素菌株。
1. 取产细菌素菌株的稀释菌液（100 µL）加入4 mL预热的MRS软琼脂（50 °C，0.8%琼脂）中，涡旋混匀后倾注于MRS琼脂平板（1.5%琼脂）上；此层称为第一层。
2. 将另外4 mL无细胞的MRS软琼脂（0.8%琼脂）倾注于第一层之上，使所有菌体包埋于软琼脂中。
  注意：该层的作用是防止菌体在琼脂平板表面形成菌落。若菌体在表面生长，在后续倾注指示菌（步骤4.3.4）时容易发生位移，从而干扰实验结果的判读。此层称为第二层。
3. 在超净....

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琼脂平板上的细菌生长；培养皿实验；微生物学研究；菌落形成分析。
图1：通过三层法检测从粪便中分离的乳酸菌（LAB）的细菌素产生能力（详见实验步骤）

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