一种用于评估细菌菌株氧化应激反应的斑点平板实验方法

摘要

来源：Ketelboeter, L. M. 等，抑制细菌脓黑色素生成及其对氧化应激敏感性增加的检测方法。视觉化实验杂志 (2015)

本视频展示了一种用于评估细菌菌株氧化应激反应的斑点平板实验方法。某些菌株能够产生一种抗氧化色素——吡咯黑素。相反，经测试试剂处理后导致吡咯黑素生成减少的菌株，对氧化应激的敏感性增加，与能够产生吡咯黑素的菌株相比，其细胞活力下降。

方案

1. 培养基、抗生素和2-[2-硝基-4-(三氟甲基)苯甲酰]-1,3-环己二酮（NTBC）的配制

1. 制备LB（Luria-Bertani）液体培养基（1% 胰蛋白胨，0.5% 酵母提取物，0.25% 氯化钠，NaCl 溶于 H₂O），分装至适当体积。经高压灭菌后，室温保存。
2. 在250 ml 三角瓶中制备100 ml LB 琼脂培养基（1% 胰蛋白胨，0.5% 酵母提取物，0.25% NaCl，1.5% 琼脂溶于 H₂O）。高压灭菌后，室温保存。倾注平板前需确保琼脂完全融化。
   注意： 每个含100 ml LB 琼脂的三角瓶可制备4个平板。可根据实验所需平板数量调整LB琼脂的制备量。
3. 制备磷酸盐缓冲液（PBS）（137 mM NaCl，2.7 mM 氯化钾，KCl，10 mM 磷酸氢二钠，Na₂HPO₄，2 mM 磷酸二氢钾，KH₂PO₄）。通过高压灭菌或过滤灭菌，室温保存。
4. 制备庆大霉素、卡那霉素和妥布霉素的抗生素储备液。
   1. 为 Pseudomonas aeruginosa 菌株配制适当浓度的抗生素储备液，包括100 mg/ml 庆大霉素、30 mg/ml 卡那霉素和10 mg/m....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
2-[2-硝基-4-(三氟甲基)苯甲酰基]-1,3-环己二酮 (NTBC)	Sigma-Aldrich	SML0269-50mg	又称尼替西农。可溶于DMSO。
H2O2	Sigma-Aldrich	216763-100ML	30 wt.% 水溶液。已稳定化。