用于筛选抗菌剂的 Peg 板生物膜测定

Abstract

来源:Dalecki， AG 等人 使用基于刃天青的药物敏感性测定靶向生物膜相关的金黄色葡萄球菌。J. Vis. Exp. （2016 年）

该视频演示了一种使用钉板筛选有效消除生物膜的抗菌化合物的检测方法。该方法监测抗菌化合物处理后生物膜的代谢状态，有助于确定最低生物膜根除浓度。

Protocol

1. 生物膜起始

1. 在营养丰富的培养基中培养产生生物膜的生物体。将金黄色葡萄球菌菌株 Newman 接种在甘油原液中的 10 ml Mueller-Hinton 培养基中。在生物安全柜内执行所有涉及处理金黄色
葡萄球菌的工作。
2. 在 37 °C 下在旋转振荡器 （100-200 rpm） 上孵育 16 小时。
3. 使用分光光度计和标准比色皿（光程:1 厘米）测定培养物的 OD₆₀₀。
4. 使用以下公式计算在螯合的罗斯威尔公园纪念研究所培养基 （CRPMI） 中制备 20 ml OD_{600（接种物）}为 0.1 的接种物所需的培养物体积 （V）:[V = 20 ml*0.1/OD_{600（培养物）}]。
   1. 将计算出的培养物体积（从上面）加入离心管中，并以 10,000 x g 旋转 1 分钟沉淀细胞。为了制备生物膜接种物，吸出用过的生长培养基并将细胞沉淀重悬于 20 ml CRPMI 中。
5. 将接种物倒入 25 ml 储液器中。
小心地将
6. 无菌 96 孔钉板的盖子笔直向上拉。
   注意:必须注意不要污染从盖子垂下的钉子。盖子可以倒置在生物安全柜内的干净表面上。
7. 使用 200 μl 多通道移液器，向底板 A 至 G 行的每个....

Results

图 1.挑战板布局。激发板布局示例，可容纳四种化合物以 6 种不同浓度一式三份进行平行测试。还包括未处理和无菌对照。布局设计支持使用多通道移液器方便地在板内制备连续稀释液。浓度以 μM 为单位。

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Materials