免疫组织化学法研究巨噬细胞与浸润免疫细胞之间的关系

摘要

来源：Albano-Aluquin, S. 等，叶酸受体β巨噬细胞及血管免疫微环境在巨细胞动脉炎中的免疫组织病理学研究。J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了一种用于量化颞动脉活检组织中巨噬细胞占总浸润免疫细胞群体相对比例的技术。通过对受自身免疫性疾病影响的组织切片进行免疫组织化学染色，可特异性地标记具有特定受体的免疫细胞，从而在视觉上将其与其他细胞区分开来。

方案

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。

1. 获取颞动脉活检后的组织病理学制备与处理

注意： 颞动脉活检（TAB）由认证外科医生在局部麻醉和无菌条件下进行。手术取材时，从病变较重的一侧获取一段长约3 cm的动脉组织，立即用福尔马林固定24小时，随后切成3至4 mm的小段，包埋于石蜡中，并注意确保组织在蜡块中的正确方向，之后在室温下保存。在确认病历资料后进行标本选择。诊断依据为美国风湿病学会1990年标准，该标准要求受试者满足以下5项指标中的至少3项：年龄>50岁、新发头痛、颞动脉压痛、魏氏法测得红细胞沉降率>50 mm/小时，以及异常的颞动脉活检结果。 出于安全考虑，处理标本、化学试剂和抗体时必须始终佩戴防护手套。

1. 使用切片机从包埋块中切下4-5 µm厚的切片，并用苏木精和伊红（H&E）染色。选用选定的正常组织对照切片以确保质量。
2. 将切下的切片漂浮于40 °C的温水浴中以去除皱褶，然后用涂覆过的玻璃载玻片捞取。  将载玻片置于60 °C烘箱中的加热板上，加热60分钟，以促进切片干燥并牢固附着于载玻片上。
3. 将载玻片置于60 °C烘箱中的加热板上，加热60分钟，以促进切片干燥并牢固附着于载玻片上。
4. 将3个切片固定在显微镜载玻片上。
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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
切片机	Reichert-Jung
普通和磨砂载玻片及盖玻片	Fisher Scientific
垂直支架	Fisher Scientific
光学显微镜	Olympus BX60 microscope
二甲苯
蒸馏水中的丙酮			浓度分别为 100%、90%、70%
Tris缓冲盐溶液（TBS）	Dako Wash BufferS3006
含3%过氧化氢的TBS溶液
二氨基联苯胺（DAB）	Sigma Fast Tablet set
Chemical Permount 封片介质	Fisher Scientific	SP-15-100
Harleco Gill's III 苏木精染液	Fiisher Scientific 23-750-019
Harleco Eosin Y 1% 醇储备液	Fisher Scientific	23-749-977
10 mM 柠檬酸一水合物（pH 6.0）
多克隆兔抗叶酸受体β	Manohar Ratnam		最佳稀释比例为1:800
单克隆小鼠抗人CD68抗体	Dako	M071801	最佳稀释比例为1:200
多克隆兔抗CD3抗体	Agilent Dako	A0452	最佳稀释比例为1:100
聚合物山羊抗兔/鼠二抗	Dako
胎盘组织			作为FRB阳性对照