免疫细胞表型和功能表征的条形码检测

Abstract

来源:Baxter， R. M. 等人 通过质谱流式细胞术对外周全血中免疫表型和细胞因子产生进行单细胞分析。J. Vis. Exp. （2018 年）。

该视频重点介绍了一种单细胞蛋白质组学方法，该方法使用重金属偶联抗体进行不同的细胞条形码编码。随后，应用免疫染色和质谱流式细胞术来评估人全血来源免疫细胞中的免疫表型和功能改变。

Protocol

1. 裂解/固定血细胞的条形码

1. 将 -80 °C 储存中的裂解/固定细胞样品在冰上缓慢解冻;最多可以用唯一的条形码标记 20 个样品，并使用该系统进行合并。用 PBS 以 1:10 的比例稀释 10X 条形码烫金缓冲液;制备足够的缓冲液，每个样品 ~3 mL。
2. 用 CSM 填充一个非无菌槽，用 1X 条形码烫发缓冲液填充一个槽。将 1 mL 冰冷的 CSM 添加到新鲜解冻的样品中，用移液管充分混合，然后转移到相应的预标记聚丙烯簇管中。
3. 取 10 μL 样品，使用自动细胞计数仪或血细胞计数器对细胞进行计数。将每个簇管中的细胞计数标准化为每样品 1.5–2 x 10⁶ 个细胞:去除并丢弃超过 2 x 10⁶ 个细胞的多余细胞体积。
4. 在室温下以 600 x g 离心细胞 5 分钟。用多通道移液器将细胞重悬于 1 mL 1X 条形码烫金缓冲液中，并在室温下以 600 x g 离心 5 分钟。吸出上清液。
5. 按照条形码键上指示的顺序将簇管在架子上对齐，以便样品与其条形码匹配。通过多通道移液器向簇状管中的所有样品中加入 800 μL 1X 条形码烫金缓冲液，不要用移液器吸头接触细胞沉淀（不要混合），以减少细胞损失。将装有簇管的架子放在一边。
6. 从 -20 °C 中取出 20 重 P....

Materials