一种基于分子的流感病毒A型和B型定量检测方法

摘要

来源：Otto, C. C. 等，流感病毒A和B的快速分子检测与区分。J. Vis. Exp. (2017)

该视频展示了一种用于定量甲型和乙型流感病毒的检测方法。该方法采用切口内切酶扩增技术，结合流感病毒特异性引物，并利用分子信标探针进行靶标检测。

方案

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。

1. 实验开始前

注意：甲型和乙型流感检测适用于鼻咽拭子样本以及保存在病毒运送培养基中的鼻咽拭子。试剂盒中包含拭子，应使用这些拭子以获得最佳性能。然而，也可使用棉、泡沫、植绒或聚酯鼻拭子采集鼻拭子样本。

1. 采集鼻拭子样本时，将拭子插入分泌物最明显或最堵塞的鼻孔。轻轻旋转拭子并推进至遇到阻力为止，然后在鼻腔壁上反复旋转数次，再缓慢从鼻孔中取出。将拭子采集后立即放入含有 3 ml 病毒运输液（VTM）的试管中储存并运送。
   注意：必须谨慎规范地进行样本采集，因为采集不当可能导致错误结果。
   注意：拭子样本应在采集后尽快进行检测。若无法立即检测，可于室温下保存最多 2 小时，或在 2–8 °C 冷藏最多 24 小时。新鲜采集的样本最有利于实现最佳检测性能。样本处理、储存和/或运输不当可能导致错误结果。
   注意：作为预防措施，操作本检测的人员在处理样本时应遵循普遍性防护原则，将所有样本视为潜在传染性物质对待。
2. 检测前将所有样本恢复至室温。
   注意：所有检测试剂组件仅限一次性使用，不得用于多次检测。禁止混用不同批号试剂盒的组件。不得使用超过有效期的试剂盒试剂。
3. 检测前将蓝色样本接收器恢复至室温。橙色检测底座无需升温至室温即可直接使用。
4. 所有检测组件在使用前应保持在铝箔包装内。按下仪器侧面的电源按钮以开启仪器。输入用户 ID 后按“确定”。

2. 运行检测

1. 开始测试流程时，触摸仪器屏幕上的“Run Test”按钮。使用屏幕上的键盘或条形码扫描器输入患者编号，然后按“OK”。打开盖子，将橙色测试底座插入橙色测试底座支架中。
2. 确认屏幕上显示的是正确的测试项目，然后按“OK”。将蓝色样本接收器插入蓝色样本接收器支架中。
   注意：请勿在将样本接收器放入仪器前打开，否则会导致洗脱缓冲液无法达到正常工作温度，可能影响测试性能。
3. 等待样本接收器预热。当仪器提示时，撕去铝箔封膜，并将待检测的患者拭子放入样本接收器中。
   注意：撕除铝箔时，请用两根手指按住样本接收器边缘，以确保其保持原位。
4. 用力将拭子在液体中混合10秒，混合过程中将拭子头部反复按压样本接收器内壁，以帮助标本从拭子上脱落。按“OK”继续。若拭子保存于病毒运输培养基（VTM）中，则先将VTM涡旋震荡10秒，然后取200 µl加入样本接收器中。
5. 将白色转移 cartridge 压入蓝色样本接收器中。持续按压样本接收器，直至橙色指示条上升。
6. 提起转移 cartridge 并将其连接至测试底座。当 cartridge 转移正确连接后，可观察到橙色指示条下降。关闭盖子，在屏幕上显示“Test Complete”（测试完成）信息前请勿打开。

3. 质量控制（QC）

1. 在主屏幕上点击“运行质控测试”。选择要运行的质控测试。通过点击“确定”确认测试类型与拟用于测试的质控样本一致，并按照屏幕提示完成测试。

4. 结果解读

1. 测试运行完成后，观察屏幕上显示的测试结果，判断是否存在甲型流感、乙型流感及未知亚型。若结果无效，需重新进行测试。

5. 维护与清洁

1. 每天使用70%乙醇或10%次氯酸钠溶液清洁仪器及周围台面。将清洁液喷洒在微湿的无绒布上进行擦拭，切勿将溶液直接倾倒于仪器表面。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Alere i 仪器	Alere	NAT-000（全球），NAT-024（美国）
Alere i 流感A & B 24 测试试剂盒	Alere	425-000（全球），425-024（美国）
Alere i 条形码扫描仪	Alere	EQ001001
Alere Universal Printer	Alere	55115（全球），alereiprinter（美国）
200 µL 微量移液器
200 µL 一次性移液器吸头
病毒运输培养基	Remel	M4-RT