通过分散实验检测生物膜解体

摘要

来源：Nickerson, K. P. 等，肠道病原体中胆盐诱导的生物膜形成：鉴定与定量技术 J. Vis. Exp. (2018)

该视频展示了一种使用多孔板进行的生物膜分散实验。缓冲液和葡萄糖处理可拆解生物膜，释放出细菌；而胆盐则诱导应激反应，使细菌保留在具有保护作用的胞外聚合物基质中。通过菌落形成单位测定，可评估生物膜的分散程度，缓冲液和葡萄糖处理组的分散率更高，表明生物膜成功解体。

方案

1. 试剂的制备

1. 含胆盐培养基：配制含0.4%胆盐（质量/体积）的胰蛋白胨大豆肉汤（TSB），将200 mg胆盐悬浮于50 mL已高压灭菌的TSB中，使用0.22 µm滤膜过滤除菌。每周新鲜配制。
   注意事项：常规使用的胆盐为从绵羊和牛胆囊中提取的牛磺胆酸钠与脱氧胆酸钠1:1混合物。如先前研究所示，葡萄糖的存在是胆盐诱导生物膜形成所必需的。TSB中的葡萄糖含量高于LB肉汤（Luria-Bertani肉汤），因此足以诱导所分析的 Shigella 及其他肠道病原菌的生物膜形成。根据待分析细菌的不同，可能需要不同的葡萄糖浓度或其他糖类需求。
2. 0.5%（质量/体积）结晶紫水溶液：将2.5 g结晶紫溶解于500 mL蒸馏水中，使用0.22 µm滤膜过滤除菌。
3. 磷酸盐缓冲液（PBS）+ 葡萄糖：将0.2 g葡萄糖溶解于10 mL 1× PBS中（终浓度为2% 质量/体积葡萄糖），使用0.22 µm滤膜过滤除菌。当日现配现用。
4. PBS + 胆盐：将40 mg胆盐溶解于10 mL 1× PBS中（终浓度为0.4% 质量/体积胆盐），使用0.22 µm滤膜过滤除菌。当日现配现用。
5. PBS + 葡萄糖和胆盐：将40 mg胆盐和0.2 g葡萄糖溶解于10 mL 1× PBS中（终浓度为0.4% 质量/体积胆盐和2% 质量/体积葡萄糖....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
胰蛋白胨大豆肉汤	Sigma-Aldrich	22092-500G
葡萄糖	Sigma	G7021-1KG
胆盐	Sigma	B8756-100G
LB 琼脂	Sigma	L7533-1KG
14 mL 培养管，17 x 100 mm，塑料，无菌	Fisher	14-959-11B
平底 96 孔板（透明）	TPP	92696
96 孔板读板仪	Spectramax
荧光读板仪	Biotek Synergy 2
37°C 摇床培养箱	New Brunswick Scientific Excella E25
37°C 板式培养箱	Thermolyne Series 5000