阿司匹林和布洛芬对巨噬细胞吞噬能力的影响

摘要

来源：
Adepemi O. Ogundeji¹，Nozethu Mjokane¹，Maphori Maliehe¹，Olihile M. Sebolai<sup>1

1</sup>自由州大学微生物学与生物化学系。

本视频展示了一种利用pH敏感型荧光染料标记的真菌细胞，评估阿司匹林和布洛芬在其最低抑菌浓度下对巨噬细胞吞噬作用影响的方法。这些药物通过抑制环氧化酶-2，减少前列腺素的生成，从而增强巨噬细胞的吞噬功能，该效应可通过pH敏感型荧光染料的荧光检测结果观察到。

方案

1. 安全注意事项

1. 工作人员应使用个人防护装备（PPE）。
2. 在II级生物安全柜中操作病原体和巨噬细胞。

2. 巨噬细胞的制备

1. 在含有 10 mL Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640) 培养基的组织培养瓶中培养小鼠巨噬细胞系 RAW 264.7，培养基中添加 20 mg/mL 链霉素、2 mM L-谷氨酰胺、20 U/mL 青霉素和 10% 胎牛血清 (FBS)。
2. 将培养瓶置于 37˚C、5% 二氧化碳 (CO₂) 的培养箱中，直至细胞融合度达到 80%。
3. 使用细胞刮轻轻刮下细胞。
4. 将悬浮细胞转移至 15 mL 离心管中。
5. 使用台盼蓝染色法测定细胞活力。 
   注意：细胞活力应高于 85% 为宜。
   使用血细胞计数板，用 10 mL 新鲜无菌 RPMI-1640 培养基将巨噬细胞浓度调整至 1 × 10⁵     个细胞/mL。 将 100 µL 细胞悬液加入无菌 96 孔平底微孔板的各孔中。在 37˚C、5% CO₂ 培养箱中孵育过夜。
   ....

材料

<表格border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"> 本文使用的材料清单 姓名 公司 目录编号 评论 琼脂 默 克 用于制备 YM 板 酵母提取物 默 克 用于制备 YM 板 麦芽提取物 默 克 用于制备 YM 板 蛋白胨 默 克 用于制备 YM 板 酵母氮碱 （YNB） 迪夫科实验室 用于隐球菌细胞的培养 葡萄糖 默 克 用于制备 YM 板 台盼蓝染色 西格玛-奥德里奇 枚举活细胞和死细胞 磷酸盐缓冲溶液 （PBS） 西格玛-奥德里奇 洗涤和稀释细胞 RPMI- 1640 培养基 生物色 巨噬细胞培养基 胎牛血清 （FBS） 生物色 用于补充 RPMI-1640 培养基 青霉素/链霉素/L-谷氨酰胺 西格玛-奥德里奇 添加到 RPMI-1640 培养基中 pHrodo 绿色酵母聚糖 A 染色剂 Life Technologies 公司 用于因 pH 值变化而对内化细胞进行染色 乙酰水杨酸（阿司匹林） 西格玛-奥德里奇 待测药物 无水乙醇 默克 用于溶解阿司匹林 布洛芬 西格玛-奥德里奇 待测药物 二甲基亚砜 （DMSO） 默克 用于溶解布洛芬 96 孔平底微量滴定板 格雷纳生物一号 用作进行反应的容器 组织培养瓶 拉塞克 用于培养巨噬细胞 15 mL 离心管 拉塞克 用于容纳巨噬细胞 细胞刮板机 拉塞克 用于从组织培养瓶中分离巨噬细胞 接种环 拉塞克 用于将培养物划线到琼脂平板上 血球计数器 马林菲尔德 测定巨噬细胞的细胞浓度 1.5 mL 塑料管 默 克 用作进行反应的容器 EZ Read 800 Research 分光光度计 生物色 读取光密度 Fluoroskan Ascent 佛罗里达州 Thermo Scientific 公司 测量荧光 CO₂ 培养箱 赛默飞世尔 用于孵育巨噬细胞 II 类生物安全柜 ESCO 安全地与病原体一起工作，而不会对用户造成伤害。