一种用于检测人巨细胞病毒中和作用的免疫荧光方法

摘要

来源：
Matthew J Murray¹, Gary R McLean^2,3, Matthew B Reeves<sup>1

1</sup>伦敦大学学院移植与免疫研究所。
²伦敦都会大学细胞与分子免疫学研究中心。
³帝国理工学院国家心肺研究所。

本视频展示了一种免疫荧光检测方法，用于测定人巨细胞病毒（HCMV）的中和作用。将病毒特异性抗体与病毒混合后，共同孵育人成纤维细胞。抗体可中和病毒，使其失去感染宿主细胞的能力，而未被中和的病毒则能够感染细胞。孵育结束后，通过免疫荧光法对被病毒感染的细胞进行定量，从而确定中和程度。

方案

1. 感染用靶细胞的制备

1. 在进行实验的前一天，将靶细胞接种于96孔板（“靶”板）中。
2. 每孔接种足够数量的细胞，以确保形成几乎完全融合（约90%）的单层细胞。
   注意：接种密度取决于靶细胞类型的相对大小。若使用人包皮成纤维细胞（HFFs），每孔接种20,000个细胞。
3. 通常每份样品应接种21个孔（纵向7孔 × 横向3孔），每块板可分析4份样品。
4. 每块板额外接种12个孔（即第8行），作为对照。

2. 病毒：抗体混合物的制备

1. 向新的96孔板第1行的3个孔（“稀释”板）中，每孔加入90 µL培养基与抗体的混合液（充分混匀），使抗体初始测试浓度为所需浓度的两倍。
   注意： 抗体的起始浓度通常为 20 µg/mL，但应通过实验确定。
2. 向从上述3个孔向下6行、横向3列的共18个孔中，每个孔加入60 µL培养基 步骤 2.1.
3. 向另外12个孔（即第8行）中各加入60 µL培养基。 
4. 从第1行将30 µL抗体稀释液转移至第2行对应的孔中。
5. 用多通道移液器轻柔地上下吹打第2行各孔内容物20次，充分....

材料