使用染料标记的磁性微球进行多重定量细菌检测

Abstract

该视频演示了使用染成不同组的羧化磁性聚苯乙烯微球进行多重定量细菌检测。该程序包括微珠-细菌复合物的形成、磁性分离和基于流式的分析，能够对同一反应孔中的多种细菌进行精确和同步定量。

Protocol

1. 捕获抗体与 MagPlex 微球的共价偶联

每种捕获抗体都使用如下所述的两步程序与特定的羧化磁性微球组偶联。

注意:还提供包括微球偶联所需的所有试剂、缓冲液和材料的偶联试剂盒（参见材料表）。

1. 根据微球随附的产品信息表中描述的说明重悬未偶联的微球悬浮液储备液。
   注意:重悬说明将取决于您的微球样品瓶的尺寸和体积。
2. 将 2.5 x 10⁶ 个储备微球转移到推荐的微量离心管中（参见材料表）。
3. 将试管放入磁力分离器中，让分离发生 60 秒。
4. 在试管仍位于磁分离器中的情况下，去除上清液。
   注意:注意不要打扰微球。
5. 从磁分离器中取出试管，通过涡旋和超声处理将微球重悬于 100 μL dH₂O 中 20 秒。
6. 重复步骤 3 和 4。
7. 从磁力分离器中取出试管，通过涡旋和超声处理重悬洗涤后的微球 80 μL 0.1 M 磷酸二氢钠，pH 6.2，持续 20 秒。
8. 向微球中加入 10 μL 50 mg/....

Results

图 1:多重捕获夹心免疫测定工作流程。将抗体偶联微球的多重混合物分配到每个孔中，并加入样品。孵育 1 小时后，洗涤反应物，并加入生物素化检测抗体。孵育 1 小时后，再次洗涤反应物，并加入 SAPE 报告基因。将反应物孵育 30 分钟，洗涤，然后在 xMAP 流式分析仪上读取结果。

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Materials