使用染料标记的磁性微球进行多重定量细菌检测

摘要

来源：
Rhea Kang¹, Gabby Mora¹, Sherry Dunbar<sup>1

1</sup>Luminex, A DiaSorin Company, Austin.

本视频展示了利用染色成不同组别的羧基化磁性聚苯乙烯微球进行多重定量细菌检测的方法。该过程包括形成微球-细菌复合物、磁性分离以及基于流式分析，从而能够在同一反应孔中精确且同时地定量多种细菌。

方案

1. 将捕获抗体共价偶联至 MagPlex 微球

每种捕获抗体均通过以下所述的两步法与特定的羧基化磁性微球集合进行偶联。

注意：也可提供包含微球偶联所需全部试剂、缓冲液和材料的偶联试剂盒（参见材料表）。 

1. 根据微球产品信息表中所述的说明，重悬储存的未偶联微球悬浮液。
   注意：重悬说明将取决于您储存微球管的大小和体积。
2. 将 2.5 × 10⁶ 个储存微球转移至推荐的微量离心管中（参见 材料表）。
3. 将管子放入磁力分离器中，静置 60 秒以完成分离。
4. 保持管子仍在磁力分离器中，小心移除上清液。 
   注意：操作时注意不要扰动微球。
5. 从磁力分离器中取出管子，加入 100 µL 去离子水（dH₂O），通过涡旋振荡和超声处理 20 秒，使微球重悬。
6. 重复步骤 3 和 4。
7. 从磁力分离器中取出管子，加入 80 µL 0.1 M 单碱磷酸钠缓冲液（pH 6.2），通过涡旋振荡和超声处理 20 秒，使洗涤后的微球....

结果

图 1:多重捕获夹心免疫测定工作流程。将抗体偶联微球的多重混合物分配到每个孔中，并加入样品。孵育 1 小时后，洗涤反应物，并加入生物素化检测抗体。孵育 1 小时后，再次洗涤反应物，并加入 SAPE 报告基因。将反应物孵育 30 分钟，洗涤，然后在 xMAP 流式分析仪上读取结果。

....

材料

<表格border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"> 本文使用的材料清单 姓名 公司 目录编号 评论 MagPlex^® 微球 Luminex® 系列 MC100xx-YY 系列 请访问网站了解各个目录号 （https://www.luminexcorp.com/magplex-microspheres/#order） 1.5 mL 微量离心管 Eppendorf 埃本多夫^™ 22431081 Protein LoBind 蛋白 LoBind® 0.1 M 二元磷酸钠 （NaH₂PO_4），pH 6.2 MilliporeSigma 第 3139 系列 活化缓冲液 1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐 （EDC） Thermo Scientific^™ 公司 皮尔斯^™ 77149 N-羟基磺基琥珀酰亚胺 （Sulfo-NHS） Thermo Scientific ™ 公司 皮尔斯^™ 24510 磷酸盐缓冲盐水 （PBS），pH 7.4 MilliporeSigma 第 3813 页 偶联缓冲器 xMAP® 抗体偶联试剂盒 Luminex® 系列 40-50016 提供用于微球耦合的可选套件。 抗大肠埃希菌 O157:H7 抗体 SeraCare 公司 电话:5310-0326 多克隆抗体，用于捕获和检测 抗沙门氏菌 CSA-Plus 抗体 SeraCare 公司 5310-0321 多克隆抗体，用于捕获和检测 抗弯曲杆菌属抗体 SeraCare 公司 5310-0324 多克隆抗体，用于捕获和检测 抗李斯特菌抗体 SeraCare 公司 5310-0319 多克隆，属特异性，用于捕获和检测 PBS，pH 7.4，含 0.02% 吐温-20、0.1% BSA、0.05% 叠氮化钠 （PBS-TBN） MilliporeSigma P3563
A7888
S8032 系列 最多可使用1% BSA 抗大肠杆菌 O157:H7 抗体 SeraCare 公司 电话:5310-0326 多克隆 （EZ-Link 磺基-NHS-LC-生物素）（皮尔斯）。 Thermo Scientific™ 公司 编号 A39257 大肠杆菌 O157:H7 SeraCare 公司 5370-0013 热灭活 沙门氏菌
血清型 鼠伤寒 SeraCare 公司 5370-0002 热灭活 空肠弯曲杆菌 SeraCare 公司 5370-0011 热灭活 单核细胞增生李斯特菌 SeraCare 公司 邮编:5370-0010 热灭活 链霉亲和素、R-藻红蛋白偶联物 （SAPE） Thermo Scientific™ 公司 S866 系列